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动物性食品中泰乐菌素、泰万菌素、替米考星残留检测研究

作　者: 汪莎莎
导　师: 操继跃
学　校: 华中农业大学
专　业: 基础兽医学
关键词: 提取净化分离检测药物残留
分类号: S859.84
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

泰乐菌素、泰万菌素和替米考星是大环内酯类抗生素,在兽医临床上被广泛用于治疗畜禽支原体和革兰氏阳性菌和某些革兰氏阴性菌所引起的感染性疾病。然而当过量或不当使用这些抗生素时,会造成药物在食品动物中的残留。抗生素及其代谢产物在动物组织和器官内蓄积达到一定浓度,可对前庭和耳蜗神经造成损害,导致眩晕和听力减退,甚至会造成对肝、肾和造血系统的严重损害。本研究的目的是针对泰乐菌素、泰万菌素和替米考星这三种大环内酯类动物专用抗生素,建立其在动物性食品中提取、分离和检测的反相高效液相色谱法。1.研究了在等度洗脱条件下,泰乐菌素、泰万菌素和替米考星同步分离检测的HPLC-UV分析方法。通过考察色谱柱、柱温、流动相组成、流速等色谱分析条件对泰乐菌素、泰万菌素和替米考星标准品的保留时间及分离检测结果的影响,优化了色谱分析条件,建立了一种反相高效液相色谱法同步检测泰乐菌素、泰万菌素和替米考星的分析检测方法。最终选择的优化的色谱条件为Agilent SB-C18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),柱温为30℃,流动相为乙腈-甲醇-0.01mol/L磷酸二氢铵溶液=45：40：15(v：v：v),检测波长为280nm,流速为1.OmL/min,运行时间15min。3种药物浓度在0.5-25μg/mL的范围内,峰面积与质量浓度呈现良好的线性关系(相关系数r>0.9990),此方法的最低检测限为0.25μg/mL,最低定量限均为0.5μg/mL,同内和同间变异系数均小于5%。2.研究了牛奶、鸡蛋和猪肉中泰乐菌素、泰万菌素和替米考星的提取、净化、富集浓缩等样品前处理方法。从提取溶剂、固相萃取柱、淋洗液与洗脱液、洗脱液用量等方面对动物性食品中泰乐菌素、泰万菌素和替米考星的提取、净化进行了分析,最终确定了以乙腈为提取剂,选用ProElut C18固相萃耿柱净化生物样品,选定5%乙腈水为淋洗液,乙腈为洗脱液,洗脱液的体积为6mL。在本试验建立的色谱检测方法下,牛奶、鸡蛋和猪肉中泰乐菌素、泰万菌素和替米考星的平均回收率为63.81～84.71%,最低检测限均为20μg/Kg,最低定量限均为25μg/Kg。此方法的日内变异系数小于5%,日间变异系数小于10%。

全文目录

摘要  7-8
Abstract  8-10
縮略语表  10-11
1 前言  11-27
  1.1 泰乐菌素、泰万菌素和替米考星概况  11-15
    1.1.1 泰乐菌素、泰万菌素和替米考星的理化性质  11-12
    1.1.2 泰乐菌素、泰万菌素和替米考星的药理作用  12-13
    1.1.3 泰乐菌素、泰万菌素和替米考星的抗菌作用机制和耐药机制  13-14
    1.1.4 泰乐菌素、泰万菌素和替米考星的代谢与残留  14-15
  1.2 泰乐菌素、泰万菌素和替米考星分析检测技术  15-21
    1.2.1 微生物效价法  15-16
    1.2.2 免疫测定法  16
    1.2.3 薄层色谱法(TLC)  16-17
    1.2.4 毛细管电泳法(CE)  17
    1.2.5 气相色谱-质谱联用法(GC-MS)  17-18
    1.2.6 高效液相色谱法(HPLC)  18-19
    1.2.7 高效液相色谱-质谱联用法(HPLC-MS)或高效液相色谱-串联质谱法(HPLC-MS-MS)  19-20
    1.2.8 超高效液相色谱(UPLC)  20-21
    1.2.9 表面等离子体共振技术  21
  1.3 样品前处理方法  21-26
    1.3.1 提取溶剂  22-23
    1.3.2 液液萃取(LLE)  23
    1.3.3 固相萃取(SPE)  23-25
    1.3.4 在线净化  25
    1.3.5 加压液体萃取(PLE)  25-26
    1.3.6 液相微萃取(LPME)  26
  1.4 研究内容和目的  26-27
    1.4.1 研究内容  26
    1.4.2 研究目的  26-27
2 泰乐菌素、泰万菌素和替米考星分析方法的建立  27-34
  2.1 试验材料  27-28
    2.1.1 仪器设备  27-28
    2.1.2 药品与试剂  28
  2.2 试验方法  28-29
    2.2.1 所需试液的配制  28-29
    2.2.2 色谱条件  29
    2.2.3 标准曲线的绘制  29
    2.2.4 方法学的验证  29
    2.2.5 灵敏度(检测限和定量限)的确定  29
  2.3 结果  29-30
    2.3.1 泰乐菌素、替米考星、泰万菌素的色谱行为  29-30
    2.3.2 标准曲线及线性范围  30
    2.3.3 方法学的验证结果  30
    2.3.4 灵敏度(检测限和定量限)  30
  2.4 讨论  30-33
    2.4.1 色谱柱的选择  30-31
    2.4.2 柱温的选择  31-32
    2.4.3 流动相的选择和优化  32
    2.4.4 流速的选择  32-33
  2.5 本章小结  33-34
3 动物性食品中泰乐菌素、泰万菌素和替米考星残留检测  34-46
  3.1 实验材料  36-37
    3.1.1 仪器设备  36
    3.1.2 药品与试剂  36-37
    3.1.3 试验样品  37
  3.2 试验方法  37-40
    3.2.1 所需试液的配制  37
    3.2.2 样品提取方法  37-38
    3.2.3 样品净化方法  38
    3.2.4 色谱条件  38
    3.2.5 回收率的考察  38-39
    3.2.6 变异系数的考察  39
    3.2.7 灵敏度(检测限和定量限)的确定  39-40
  3.3 结果  40-41
    3.3.1 回收率和变异系数  40-41
    3.3.2 灵敏度(检测限和定量限)  41
  3.4 讨论  41-45
    3.4.1 提取溶剂的选择  41-42
    3.4.2 固相萃取柱的选择  42-43
    3.4.3 淋洗液与洗脱液的选择和优化  43-44
    3.4.4 洗脱液用量的选择和优化  44-45
    3.4.5 样品提取和净化时应注意的操作  45
  3.5 本章小结  45-46
4. 结论  46-47
  4.1 建立了泰乐菌素、泰万菌素和替米考星标准品同步检测的高效液相色谱法  46
  4.2 建立了牛奶、鸡蛋和猪肉中泰乐菌素、泰万菌素和替米考星的样品前处理方法并进行了测定  46-47
参考文献  47-56
致谢  56-57
附录  57-61
  附录1 标准工作曲线  57-59
  附录2 标准品色谱图  59-60
  附录3 空白样品及加标样品色谱图  60-61

动物性食品中泰乐菌素、泰万菌素、替米考星残留检测研究

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