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桦褐孔菌多糖与其复方抗弓形虫作用的比较研究

作　者: 王韵篪
导　师: 鞠玉琳
学　校: 延边大学
专　业: 基础兽医学
关键词: 桦褐孔菌多糖抗弓形虫复方比较研究
分类号: S853.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
下　载: 43次
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内容摘要

弓形虫病作为一种严重危害人畜健康的寄生虫疾病,其防治方法一直是世界研究的热点课题。本研究以已被证明具有抗弓形虫作用的黄芩、甘草、桦褐孔菌和马齿苋作为试验药物,提取有效成分并组合成复方,通过体外体内抗虫试验,病理学观察及细胞因子含量的变化,比较桦褐孔菌多糖和其所组复方的抗虫效果,为抗弓形虫药物的开发利用提供理论及试验依据。方法：分别提取甘草、黄芩的醇提物及桦褐孔菌和马齿苋中的多糖,含量测定后,进行体外体内抗虫试验。体外试验：弓形虫感染正常vero细胞建立体外感染模型,利用MTT法进行单药及不同组方的细胞毒性试验及抗虫试验,通过细胞增殖率的比较,确定4种药物提取物体外抗虫效果,筛选出体外抗虫的最佳组方；体内试验：弓形虫感染健康小鼠建立体内感染模型,根据体外试验结果,与桦褐孔菌多糖比较,通过存活率和存活时间比较,筛选出提取物不同组合的最佳组方及治疗剂量；通过病理组织切片、免疫组化及透射电镜,观察药物治疗后,感染弓形虫小鼠主要脏器的病理变化；应用ELASA法检测治疗前后细胞因子伽马干扰素(IFN-Y)、白细胞介素-4(IL-4)和白细胞介素-8(IL-8)的水平变化。结果：提取物含量测定：甘草醇提物中总黄酮含量为13.4%,黄芩醇提物总黄酮含量1.8%,马齿苋多糖含量为81.6%,桦褐孔菌多糖含量为81.2%。体外试验：甘草和黄芩醇提物表现了较好的体外抗虫作用,甘草和黄芩复方组、4种提取物复方组抗虫作用最佳,24h、48h的细胞增殖率均高于阳性蒿甲醚组。体内抗虫试验：4种提取物复方中剂量组的存活率最高,且存活时间最长,平均存活天数和最长存活天数分别为9.9d和13d,长于桦褐孔菌多糖对照组的9.1d和11d,显示了良好的治疗效果,各提取物的最佳剂量为中剂量；体外、体内抗虫试验结果表明,4种提取物的组方为最佳组方。病理组织切片、免疫组化观察结果表明,同一天相比较,复方组病理损伤稍轻于桦褐孔菌多糖组,复方组脏器内弓形虫虫体量少于桦褐孔菌多糖组,明显少于模型组。透射电镜结果显示,复方组和桦褐孔菌多糖组对急性感染弓形虫小鼠肝细胞无明显毒副作用。细胞因子水平检测结果,复方组IFN-γ水平显著高于其他各组(P<0.05)；复方组和桦褐孔菌多糖组感染弓形虫小鼠IL-4水平明显升高,且保持在高于感染前的水平。二者比值结果显示,复方组升高速度较桦褐孔菌多糖组缓和,中期时又呈现了一个上升趋势后回落到较低的水平,桦褐孔菌多糖组在上升后呈持续下降,并维持在较低水平；复方组与桦褐孔菌多糖组感染弓形虫小鼠IL-8水平比较差异均不显著(P<0.05),复方组和桦褐孔菌多糖组在感染后第4d出现峰值,之后持续在相对高的水平上；感染组的值持续升高。细胞因子水平试验结果显示,复方组与桦褐孔菌多糖组在细胞因子水平的调节上表现了相近的效果,都起到了良好的抗弓形虫和保护宿主的作用。结论：4种提取物均具有良好的抗弓形虫作用,最佳的抗弓形虫复方为4种提取物组方；最佳治疗剂量为黄芩醇提物50mg/10g体重、甘草醇提物25mg/10g体重、马齿苋多糖2mmg/10g体重、桦褐孔菌多糖2mg/10g体重；所组复方对感染弓形虫小鼠具有较好的保护作用,可明显提高感染弓形虫小鼠的存活率,延长其存活时间,减轻机体病理变化及炎症反应,效果好于桦褐孔菌多糖；桦褐孔菌多糖所组复方可使小鼠血清IFN-Y、IL-4、IL-8值升高到适当水平,通过有效地调节感染弓形虫小鼠细胞因子水平,使Th1/Th2恢复平衡状态,达到抗弓形虫,保护宿主的目的,作用效果与桦褐孔菌多糖效果相近；桦褐孔菌多糖所组复方体现了良好的体内体外抗虫作用,且好于桦褐孔菌多糖组,发挥了复方的药效增强的优点。

全文目录

摘要  6-8
Abstract  8-11
前言  11-18
  1 弓形虫病的研究概述  11-14
    1.1 弓形虫的概况及危害  11-12
    1.2 弓形虫病的流行特点  12
    1.3 弓形虫病的症状、病理变化  12
    1.4 弓形虫免疫学研究概况  12-13
    1.5 弓形虫诊断方法的研究进展  13-14
  2 弓形虫病的防治  14-15
    2.1 抗弓形虫疫苗的研究进展  14
    2.2 弓形虫病的治疗现状  14-15
  3 药用真菌桦褐孔菌的研究现状  15-16
  4 桦褐孔菌多糖的药理作用  16
  5 本研究的目的及意义  16-18
材料与方法  18-29
  1 材料  18-20
    1.1 虫体和细胞  18
    1.2 试验动物  18
    1.3 试验用药材  18
    1.4 试验用试剂  18-19
    1.5 主要仪器  19
    1.6 试验所需主要试剂的配制  19-20
  2 方法  20-29
    2.1 受试药物提取物的制备及含量测定  20-23
    2.2 受试药物体外抗弓形虫筛选试验  23-25
    2.3 受试药物体内抗弓形虫筛选试验  25-26
    2.4 最佳复方与桦褐孔菌多糖对感染弓形虫小白鼠病理学变化影响的比较试验  26-27
    2.5 免疫组化试验  27-28
    2.6 最佳复方与桦褐孔菌多糖对感染弓形虫小白鼠血清中INF-γ,IL-4,IL-8水平影响的比较试验  28
    2.7 数据处理  28-29
结果  29-46
  1 受试药物提取物含量测定结果  29
  2 受试药物提取物体外抗弓形虫筛选试验结果  29-33
    2.1 受试药物对Vero细胞毒性试验  29-30
    2.2 受试药物体外抗虫试验  30-31
    2.3 受试药物组方后对Vero细胞毒性试验  31-32
    2.4 受试药物组方后体外抗虫试验  32-33
  3 受试药物提取物体内抗弓形虫筛选试验结果  33-34
  4 最佳复方与桦褐孔菌多糖对感染弓形虫小白鼠病理学变化影响的比较结果  34-42
    4.1 眼观观察结果  34-35
    4.2 病理组织学观察结果  35-38
    4.3 透射电镜结果  38-40
    4.4 免疫组化试验结果  40-42
  5 最佳复方与桦褐孔菌多糖对感染弓形虫小白鼠血清中INF-γ,IL-4,IL-8水平影响的比较结果  42-46
    5.1 血清IFN-γ的检测结果  42-43
    5.2 血清IL-4的检测结果  43-44
    5.3 血清IFN-γ/IL-4含量比  44-45
    5.4 血清IL-8的检测结果  45-46
讨论  46-51
结论  51-52
参考文献  52-57
致谢  57-58
作者简介  58-59
附录  59

桦褐孔菌多糖与其复方抗弓形虫作用的比较研究

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