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tPA-PAI-1系统在牛卵丘卵母细胞复合体体外成熟进程中的表达

作　者: 关洪敏
导　师: 曹贵方; 李海军
学　校: 内蒙古农业大学
专　业: 基础兽医学
关键词: tPA 牛 卵丘细胞 卵母细胞 FSH FRBI-10
分类号: S823
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要


为了初步了解组织型纤溶酶原激活剂(tissue-plasminogen activator, tPA)、1型纤溶酶原激活剂抑制齐(?)(plasminogen activator inhibitor-1, PAI-1)和纤溶酶原(plasminogen, PLG)在牛卵丘卵母细胞复合体体外成熟进程中的潜在作用；本文运用实时定量RT-PCR技术分别检测体外成熟过程中不同时间段(0h、8h、16h、24h)、添加不同浓度卵泡刺激素(follicle-stimulating hormone, FSH)以及卵泡刺激素受体结合抑制剂(follicle-stimulating hormone receptor-binding inhibitor, FRBI-10)成熟培养16h后牛卵丘细胞和卵母细胞中tPA、PAI-1及PLG基因相对表达变化,观察添加不同浓度FSH成熟培养16h后卵丘细胞膨胀程度差异,并统计卵母细胞第一极体排出情况。1.卵丘卵母细胞复合体在体外成熟过程中,卵丘细胞和卵母细胞tPA mRNA相对表达量,于体外成熟16h显著高于0h和8h,24h达到最高(P<0.05)；而卵丘细胞PAI-1mRNA相对表达量于8h达到最高,显著高于16h和24h(P<0.05)。卵丘细胞PLG mRNA相对表达量总体趋势和tPA类似,于16h显著高于0h和8h,在24h达到最高(P<0.05)。卵母细胞PAI-1mRNA相对表达量于16h显著高于0h和8h,达到最高,并显著高于24h(P<0.05)。2.在添加不同浓度FSH(0、0.01、0.1和IU/mL)体外成熟16h的各处理组,卵丘细胞中tPA mRNA相对表达量随FSH添加浓度的升高而升高,当FSH添加浓度1IU/mL,卵丘细胞之间的缝隙连接较为松散且发暗。卵丘细胞中的PAI-1mRNA相对表达量在0.01IU/mLFSH时高于其他各处理组；同时卵丘细胞PLG mRNA表达水平在0.01IU/mL FSH时达到最低,于0.1IU/mL和1IU/mL时显著升高(P<0.05)。卵母细胞tPA表达变化显示出与第一极体排出率相似的趋势,即0.01IU/mL FSH处理组的tPA mRNA水平和第一极体排出率显著高于其他处理组(P<0.05)。卵母细胞中PAI-1mRNA相对表达量在0.01IU/mL FSH时最高,显著高于其他各FSH添加组(P<0.05)。3.在添加FRBI-10体外成熟16h的各处理组,在只添加FSH组的卵丘细胞tPAmRNA相对表达量显著高于其他各处理组(P<0.05)；卵母细胞中tPA mRNA相对表达量在只添加FSH组显著高于空白组(P<0.05),在只添加FSH组,卵丘细胞和卵母细胞中PAI-1mRNA相对表达量最高,显著高于其他各处理组(P<0.05)；卵丘细胞和卵母细胞PLG mRNA相对表达量在只添加FSH组却显著低于空白组(P<0.05)。综合以上研究结果,本研究认为：牛卵丘细胞中tPA与PAI-1基因的表达受FSH正向调节,而PLG基因表达却受到FSH的抑制；进而推测,tPA-PAI-1系统对卵丘细胞在体外成熟过程中的扩散并不起促进作用；在卵丘卵母细胞复合体体外成熟过程中,tPA-PAI-1系统可能参与对牛卵泡排卵过程的调控。同时,tPA在卵母细胞中的表达是否与其第一极体排出有关,需进一步实验验证。本实验结果为进一步研究tPA-PAI-1系统在牛卵丘卵母细胞复合体体外成熟过程中的具体作用奠定了基础。

全文目录


摘要  3-5
Abstract  5-10
1 引言  10-18
  1.1 tPA、PAI-1及PLG概述  10
  1.2 FRBI-10的作用原理  10-11
  1.3 卵母细胞体内获得发育能力  11-13
    1.3.1 腔前卵泡  11-12
    1.3.2 有腔卵泡  12-13
  1.4 卵母细胞的体外成熟  13-15
    1.4.1 卵母细胞胞核成熟  13-14
    1.4.2 卵母细胞胞质成熟  14-15
    1.4.3 卵母细胞膜成熟  15
  1.5 tPA-PAI-1系统与排卵  15-17
    1.5.1 卵泡中tPA-PAI-1系统  15-17
    1.5.2 卵巢中tPA-PAI-1系统  17
  1.6 研究背景和意义  17-18
2 材料与方法  18-21
  2.1 仪器和试剂  18
  2.2 方法  18-21
    2.2.1 牛COCs的采集和体外成熟培养  18-19
    2.2.2 卵丘膨胀评定  19
    2.2.3 RNA提取和反转录  19
    2.2.4 实时定量PCR  19-21
    2.2.5 PCR扩增产物特异性的确定  21
    2.2.6 数据统计  21
3 结果与分析  21-31
  3.1 PCR产物特异性确定  21-24
    3.1.1 RT-PCR结果  21-23
    3.1.2 电泳检测RT-PCR产物结果  23-24
  3.2 成熟过程中牛卵丘细胞、卵母细胞tPA-PAI-1系统基因表达  24-25
    3.2.1 成熟过程中卵丘细胞tPA、PAI-1及PLG基因表达  24-25
    3.2.2 成熟过程中卵母细胞tPA及PAI-1基因表达  25
  3.3 添加不同浓度FSH成熟培养16h卵丘细胞、卵母细胞tPA-PAI-1系统基因表达  25-27
    3.3.1 添加不同浓度FSH成熟培养16h卵丘细胞tPA、PAI-1及PLG基因表达  25-26
    3.3.2 添加不同浓度FSH成熟培养16h卵母细胞tPA、PAI-1及PLG基因表达  26-27
  3.4 添加FRBI-10成熟培养16h卵丘细胞、卵母细胞的tPA-PAI-1系统基因表达  27-29
    3.4.1 添加FRBI-10成熟培养16h卵丘细胞tPA、PAI-1及PLG基因表达  27-28
    3.4.2 添加FRBI-10成熟培养16h卵母细胞的tPA、PAI-1及PLG基因表达  28-29
  3.5 不同浓度FSH处理组,体外成熟培养16h COCs中卵丘膨胀程度及形态  29-30
    3.5.1 卵丘膨胀程度  29
    3.5.2 COCs形态学变化  29-30
  3.6 不同FSH浓度培养16h后卵母细胞第一极体排出情况  30-31
4 讨论  31-35
  4.1 体外成熟过程中tPA-PAI-1系统基因表达与排卵的关系  31-32
  4.2 FSH对卵丘细胞中tPA-PAI-1系统表达的影响  32-33
  4.3 tPA-PAI-1系统与卵丘扩散的关系  33-34
  4.4 tPA-PAI-1系统在卵丘细胞表达对卵母细胞的影响  34-35
5 结论  35-36
致谢  36-37
参考文献  37-45
作者简介  45

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中图分类: > 农业科学 > 畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂 > 家畜 > 牛
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