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洛克沙胂促血管新生作用的初步研究

作　者: 胡成云
导　师: 张雨梅
学　校: 扬州大学
专　业: 基础兽医学
关键词: 洛克沙胂 血管新生 CAM试验 动脉环试验 CD31 免疫组化
分类号: S816.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要


洛克沙胂是国内外广泛使用的一种有机胂饲料添加剂,近来的研究表明其能促进人血管内皮细胞生长,存在着促血管生成作用及潜在的致癌风险。有关洛克沙胂促血管生成作用的研究极少,国内未见报道。本研究拟通过血管生成研究常用的鸡胚尿囊膜血管生成模型、大鼠动脉环血管生成模型和免疫组织化学法,在体内外初步研究洛克沙胂促血管生成作用,为探讨洛克沙肿可能的特殊毒性及潜在的致癌风险研究积累基本资料,对洛克沙胂作为饲料添加剂在畜禽生产中使用安全性的研究有积极意义。鸡胚尿囊膜(CAM)血管生成模型中,洛克沙胂的剂量分别为10.00μM.1.00μM、0.10μM.0.01μM,VEGF为阳性对照,生理盐水为阴性对照。以7日龄鸡胚尿囊膜载体给药2d后,载体周围一级血管和二级血管数的数量及相应的血管面积为评价指标。结果表明,与生理盐水对照组比较,洛克沙胂及VEGF阳性对照新生的一级血管数、二级血管数及新生血管面积率显著增加(P<0.05)；洛克沙胂在0.01μM～1.00μM范围内,随剂量增加新生血管数及面积率增加,呈现一定的剂量效应关系,1.00μM洛克沙胂组的血管数及血管面积率最大与10.0ng/ml VEGF相似；但10.00μM洛克沙胂剂量组一级和二级血管数及血管面积未随剂量增加而增加,反而减小,与0.01μM剂量相当。结论为洛克沙胂较低剂量时对鸡胚尿囊膜血管有明显的促进作用,而较高剂量(10.00μM)时促血管生成作用减弱。大鼠动脉环血管生成模型中,剂量设置同鸡胚尿囊膜试验。培养4d时,以动脉环新生的血管总数和最长血管长度为评价参数；培养6d后,以区域内新生血管数为评价参数。结果表明,培养4d时洛克沙肿不同剂量及VEGF处理与生理盐水对照组比较,新生血管数显著增加(P<0.05),且在0.01μM～1.00μM范围内,随洛克沙胂剂量增加而血管数量增加；但10.00μM洛克沙胂剂量组血管数反而减少。洛克沙胂不同处理的最长血管长度参数与阴性对照组有显著差异(P<0.05)。但VEGF组差异不显著(P>0.05),洛克沙胂不同剂量(0.10μMμ10.00μM)间无显著差异。培养6d,洛克沙胂不同剂量及VEGF组区域内血管数,与生理盐水对照组比较有显著性增加(P<0.05)。试验结果说明,洛克沙胂对大鼠动脉环新生血管有促进作用,1.00μM时促血管生成作用最强,与10ng/ml VEGF相当。洛克沙胂及VEGF处理组动脉环新生血管内皮细胞CD31免疫组化呈强阳性。综上所述,洛克沙胂在一定剂量范围内,在体内外具有明显的促血管新生作用。

全文目录


摘要  3-4
ABSTRACT  4-6
目录  6-9
符号说明  9-10
第一部分 文献综述  10-26
  1 血管新生  10-12
    1.1 血管新生概念  10
    1.2 血管新生过程  10-11
    1.3 血管新生类型  11-12
  2 血管新生调节  12-18
    2.1 促血管生成因子  12-15
      2.1.1 VEGF  13-14
      2.1.2 FGF  14
      2.1.3 促血管生成素  14-15
      2.1.4 血管生成素  15
      2.1.5 其他促血管生长因子  15
    2.2 血管新生抑制因子  15-18
      2.2.1 内源性血管新生抑制因子  15-16
      2.2.2 VEGF或VEGFR拮抗剂  16-17
      2.2.3 酶类及其他抑制剂  17-18
  3 血管新生研究模型  18-22
    3.1 体内模型  18-20
      3.1.1 鸡胚绒毛尿囊膜试验模型  18
      3.1.2 基质胶塞试验模型  18-19
      3.1.3 角膜微囊试验模型  19
      3.1.4 背侧皮肤室-气囊模型  19-20
    3.2 体外模型  20-21
      3.2.1 大鼠动脉环试验模型  20
      3.2.2 管形成试验模型  20-21
      3.2.3 内皮细胞增殖、迁移和侵袭试验模型  21
    3.3 整体模型  21-22
  4 与血管新生相关的疾病  22-23
    4.1 新生血管过多  22
    4.2 血管新生与肿瘤  22-23
  5 砷化物与肿瘤、血管新生  23-26
    5.1 无机砷化物  23-24
    5.2 有机砷化物  24-26
第二部分 试验内容  26-44
  第一章 洛克沙胂对鸡胚尿囊膜血管生成的影响  26-34
    1 材料  26-27
      1.1 药品  26
      1.2 试剂  26
      1.3 仪器及其他  26-27
      1.4 试剂溶液与载体  27
      1.5 实验动物  27
    2 方法  27-28
      2.1 鸡胚制备及分组  27-28
      2.2 给药方法  28
      2.3 CAM血管新生评价  28
      2.4 统计学处理  28
    3 结果  28-32
      3.1 洛克沙胂对鸡胚存活率的影响  28-29
      3.2 洛克沙胂对7日龄CAM血管新生数量的影响  29-31
      3.3 洛克沙胂对鸡胚CAM新生血管面积的影响  31-32
    4 讨论  32-33
      4.1 CAM中不同参数对血管新生评价的影响  32
      4.2 关于CAM模型研究中应注意事项  32-33
        4.2.1 孵化时间  32-33
        4.2.2 开窗方法  33
        4.2.3 不同评价指标的比较  33
        4.2.4 其他注意事项  33
    5 结论  33-34
  第二章 洛克沙胂对大鼠动脉环血管新生的影响  34-44
    1 材料  34-35
      1.1 药品  34
      1.2 试剂  34
      1.3 仪器及其他  34-35
      1.4 试剂配制  35
      1.5 实验动物  35
    2 方法  35-37
      2.1 大鼠胸主动脉的分离  35
      2.2 动脉环的制备  35-36
      2.3 动脉环试验  36
      2.4 新生血管的观察和评价  36
      2.5 动脉环新生血管CD31免疫组化  36-37
      2.6 数据处理  37
    3 结果  37-41
      3.1 对大鼠动脉环新生血管的影响  37-41
        3.1.1 不同培养时间对动脉环新生血管的影响  37-39
        3.1.2 不同处理组对动脉环新生血管的影响  39-41
      3.2 动脉环新生血管CD31免疫组化  41
    4 讨论  41-43
    5 结论  43-44
全文结论  44-45
参考文献  45-50
致谢  50-51
攻读学位期间发表的学术论文目录  51-52

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中图分类: > 农业科学 > 畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂 > 普通畜牧学 > 饲料 > 饲料标准
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