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山豆根多糖的提取工艺及抗肿瘤活性研究

作　者: 彭湘君
导　师: 李青松
学　校: 赣南师范学院
专　业: 有机化学
关键词: 山豆根多糖提取与分离抗肿瘤作用微流控芯片
分类号: TQ914
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

山豆根(Radix Sophorae Tonkinensis)为豆科槐属植物越南槐(Sophora tonkinensis Gapnep)的干燥根茎，为我国传统中药，具有多方面的生物活性和药理作用，有一定的抗肿瘤活性。本论文进行了山豆根多糖的提取分离，优化了山豆根多糖提取工艺，并通过抗肿瘤细胞实验探讨了山豆根多糖的抗肿瘤活性及其作用机制。本研究的内容分四章，主要内容有：第一章文献综述。山豆根多糖是山豆根药材中的重要物质，是山豆根中主要生物活性成分之一。山豆根多糖在增强机体免疫、抗氧化等作用、抗肿瘤等方面有显著活性。本章综述了山豆根多糖提取工艺﹑分离纯化方法﹑化学组成及结构﹑生理活性以及近几年在动物试验中的研究结果等方面的研究，并展望了山豆根多糖后期的主要研究方向。第二章山豆根多糖的提取分离，纯化。本章采用正交设计法筛选山豆根多糖最佳提取工艺，用苯酚-硫酸比色法测定其含量。山豆根多糖的最佳提取工艺为：提取料液比为1:10，提取次数为2次，提取时间为90min，测得山豆根多糖的含量3.62%。该方法简便，准确，灵敏度高，适用于山豆根多糖的提取。第三章山豆根多糖的鉴定。本章使用苯酚-硫酸法显色，运用紫外分光光度法测定纯化后的山豆根多糖的总含量。以红外分光光度计表征多糖中的特征基团。第四章山豆根多糖抗肿瘤活性实验研究。本章使用了微流控芯片技术对山豆根多糖的抗肿瘤作用进行了研究，在微流控芯片上集成了浓度梯度生成器和细胞培养单元。MTT实验证明一定浓度的山豆根多糖能抑制人肝癌SMMC-7721和人食管癌细胞EC109；集落形成实验结果表明山豆根多糖能有效抑制体外肝癌细胞集落群的形成；通过流式细胞技术表征山豆根多糖能诱导早期的人肝癌SMMC-7721细胞凋亡。

全文目录

摘要  3-4
Abstracts  4-7
第1章文献综述  7-17
  1.1 山豆根研究简述  7-8
    1.1.1 山豆根主要成分及药理活性概述  7-8
    1.1.2 山豆根成分药理活性  8
  1.2 植物多糖抗肿瘤作用研究进展  8-12
  1.3 山豆根多糖研究进展  12-17
    1.3.1 山豆根多糖的提取工艺研究  13
    1.3.2 山豆根多糖的分离纯化方法  13-14
    1.3.3 山豆根多糖的化学组成及结构  14
    1.3.4 山豆根多糖的生理活性  14-15
    1.3.5 展望  15-17
第2章山豆根多糖的提取分离和纯化  17-23
  2.1 山豆根多糖提取的工艺研究  17-21
    2.1.1 仪器与试剂  17
    2.1.2 药材  17-18
    2.1.3 实验方法  18-20
    2.1.4 讨论  20-21
  2.2 山豆根多糖提取  21-22
    2.2.1 水提多糖  21
    2.2.2 Sevage 法除蛋白  21
    2.2.3 醇沉多糖  21-22
  2.3 山豆根多糖的纯化  22-23
第3章山豆根多糖的结构及纯度表征  23-24
  3.1 山豆多糖含量测定  23
  3.2 红外光谱法结构表征  23-24
第4章山豆根多糖的抗肿瘤作用  24-43
  4.1 微流控芯片上肿瘤细胞培养概述  24-30
  4.2 浓度梯度和细胞培养芯片制作  30-35
    4.2.1 浓度梯度芯片制作  30-32
    4.2.2 细胞培养芯片制作  32-33
    4.2.3 浓度自动分配芯片对浓度的表征  33-35
  4.3 MTT 实验  35-39
    4.3.1 单层肿瘤细胞的培养技术  35-36
    4.3.2 对数期生长细胞确定  36
    4.3.3 用 MTT 实验方法测定山豆根多糖的抗肿癌作用  36-39
  4.4 集落形成实验  39-40
  4.5 流式细胞技术检测细胞凋亡  40-41
  4.6 结果与讨论  41-42
  4.7 论文后记及后期研究  42-43
参考文献  43-48
致谢  48

山豆根多糖的提取工艺及抗肿瘤活性研究

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