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抗非酒精性脂肪肝水飞蓟宾PLGA微球的研究

作　者: 何杨
导　师: 蔡程科
学　校: 北京中医药大学
专　业: 中药制药学
关键词: 水飞蓟宾 PLGA微球 快速膜乳化法 非酒精性脂肪肝 HepG2细胞
分类号: TQ461
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
下　载: 37次
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内容摘要


目的制备粒径均一可控的Silybin PLGA微球并对其制备工艺进行优化,研究Silybin PLGA微球的理化性质、体外释放行为,以及对其抗非酒精性脂肪肝的疗效进行细胞学评估,为Silybin PLGA徽球动物体内研究奠定实验基础,并为更多中药或天然药物有效成分(组)的微球给药系统制备提供方法支持。方法建立Silybin含量测定的高效液相色谱方法；以Silybin为模型药物,聚乳酸-聚乙醇酸(PLGA)为载体材料,结合快速膜乳化-溶剂萃取/挥发法制备Silybin PLGA微球。以体积平均粒径(D0.5)、径距(span)为指标,单因素考察油相溶剂、膜孔径、过膜压力、离心时间、固化液种类等因素对微球质量的影响,结合单因素考察结果,筛选三个对微球性质影响较大的因素药辅比、PVA浓度、油水相体积比通过正交设计对工艺进行优化；并从微球的形态学、粒径大小及分布、再分散性、载药量、包封率、稳定性等方面对微球质量进行评价；采用直接释药法研究Silybin PLGA微球的体外释药规律,并考察释放介质体积对微球释药速度的影响；药效学试验分模型组、微球给药组Silybin提取物组、正常组,采用长链脂肪酸棕榈酸和油酸的混合物体外诱导HepG2细胞,建立肝细胞脂肪变性模型,以油红O染色,倒置显微镜定性观察细胞内脂滴情况,同时用Elisa试剂盒检测细胞上清中TNF-α炎性因子的含量。结果通过单因素考察确定SPG膜孔径为2.8μm,过膜压力为1.0MPa,离心时间为20min,固化液为生理盐水,正交优选确定Silybin PLGA微球的最佳制备工艺为药辅比1：4,PVA质量分数3%,油水相体积比1：19,制备的微球圆整度好,表面光滑,平均粒径(2.634±0.35)μm,径距(13.326+3.06),载药量(14.84±0.76)%,包封率(56.16±3.77)%。体外释药研究确定释放介质体积为40mL,四批正交验证Silybin PLGA微球释放行为基本一致,经过12h的快速释放后,四批样品均趋于平稳缓释。体外药效学实验结果表明,Silybin PLGA微球各浓度组细胞内脂肪沉积均轻于模型组；与模型组比较,SilybinPLGA微球各浓度组细胞上清中TNF-α炎性因子的表达均低于模型组,且具有显著性差异(P<0.01)。结论通过Silybin PLGA微球形态学、粒径大小及分布、再分散性、载药量、包封率、稳定性、体外释药行为等方面对微球质量进行评价,发现优化工艺所制备的微球粒径均一可控,质量稳定,说明快速膜乳化法可用于制备中药难溶性成分Silybin PLGA微球,但体外释药试验提示微球体系中存在大量游离药物,造成严重的突释。后期对工艺进行改善,并未得到好结果。Silybin PLGA微球各组对游离脂肪酸诱导的HepG2细胞内脂肪沉积均有改善作用,对炎性因子TNF-α的分泌有显著的抑制作用。

全文目录


目录  3-5
摘要  5-7
Abstract  7-9
英文缩略词  9-11
前言  11-13
  参考文献  12-13
综述部分  13-35
  第一篇 非酒精性脂肪肝的研究概况  13-17
    1.1 概述  13
    1.2 NAFLD的发病机制  13-15
    1.3 NAFLD的实验研究  15-17
  第二篇 水飞蓟素的研究进展  17-21
    2.1 概述  17
    2.2 药理作用  17-20
    2.3 应用前景  20-21
  第三篇 载药微球制备方法的研究进展  21-28
    3.1 概述  21
    3.2 微球的制备方法  21-28
  参考文献  28-35
实验研究部分  35-113
  第一章 Silybin PLGA微球的制备工艺研究  35-63
    1.1 材料与仪器  35
      1.1.1 试药  35
      1.1.2 仪器  35
    1.2 方法与结果  35-57
      1.2.1 Silybin HPLC检测的方法学考察  35-40
      1.2.2 Silybin PLGA微球制备工艺研究  40-57
    1.3 小结  57-59
    1.4 讨论  59-62
    参考文献  62-63
  第二章 Silybin PLGA微球理化性质的研究  63-77
    2.1 材料与仪器  63
      2.1.1 试药  63
      2.1.2 仪器  63
    2.2 方法与结果  63-75
      2.2.1 徽球形态学研究  63-67
      2.2.2 微球粒径及其分布研究  67-68
      2.2.3 徽球中Silybin分散状态的研究  68-69
      2.2.4 微球的再分散性  69
      2.2.5 Silybin PLGA徽球载药量和包封率的测定  69-71
      2.2.6 Silybin PLGA微球初步稳定性考察  71-75
    2.3 小结  75
    2.4 讨论  75-77
  第三章 Silybin PLGA微球体外释药的研究  77-93
    3.1 材料与仪器  77
      3.1.1 试药  77
      3.1.2 仪器  77
    3.2 方法与结果  77-90
      3.2.1 Silybin在释放介质中平衡溶解度的测定  77-78
      3.2.2 Silybin在释放介质中稳定性的研究  78
      3.2.3 体外释放试验  78-90
    3.3 小结  90
    3.4 讨论  90-92
    参考文献  92-93
  第四章 Silybin PLGA微球体外抗非酒精性脂肪肝活性研究  93-113
    4.1 材料与仪器  93
      4.1.1 试药  93
      4.1.2 材料和仪器  93
    4.2 方法与结果  93-108
      4.2.1 细胞培养  93
      4.2.2 Silybin PLGA微球对HepG2细胞活力的影响  93-95
      4.2.3 HepG2细胞脂肪变性模型的建立  95-98
      4.2.4 SilybinPLGA微球对HepG2细胞脂肪变性模型的作用  98-103
      4.2.5 细胞培养液中炎性因子TNF-α的检测  103-108
    4.3 小结  108-109
    4.4 讨论  109-113
全文总结  113-115
  一、主要研究内容  113-114
  二、研究工作的创新性  114
  三、研究展望  114-115
致谢  115-117
个人简历  117

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中图分类: > 工业技术 > 化学工业 > 制药化学工业 > 中草药制剂的生产
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