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TGF-β1对小鼠体外胚胎发育和胚胎种植的影响及其作用机制的研究

作　者: 罗珊
导　师: 李尚为
学　校: 四川大学
专　业: 妇产科学
关键词: TGF-β1 体外培养 囊胚形成率 囊胚孵出率 移植胚胎种植率 IFN-γ galectin-1 实时荧光定量RT-PCR
分类号: R714.8
类　型: 博士论文
年　份: 2007年
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内容摘要


目的：观察在小鼠胚胎体外培养系统中加入不同浓度TGF-β1对小鼠胚胎发育及胚胎种植的影响，并通过比较小鼠体内发育囊胚与含不同浓度TGF-β1的小鼠胚胎培养基中生长囊胚β-半乳糖结合凝集素(galectin-1)表达水平的差异以及不同胚胎体外培养组(M16组和M16+TGF-β110ng／ml)囊胚移植后，母胎界面IL10／IFN-γ的不同，进一步探讨TGF-β1影响胚胎种植的作用机制。方法：1、比较小鼠2-细胞期胚胎在不同胚胎培养组(M16组、M16+TGF-β1 1ng／ml、M16+TGF-β1 10ng／ml和M16+TGF-β1 50ng／ml组)培养第68及92小时早期囊胚、扩张囊胚和孵出囊胚形成率：并于胚胎培养第68小时，将M16组和最适宜TGF-β1浓度组扩张囊胚进行胚胎移植，比较两组移植小鼠胚胎种植率。2、取两组移植小鼠接受胚胎移植后第6天妊娠物进行体外组织培养24小时，利用ELISA法测定培养上清液中IL-10／IFN-γ的水平并进行比较。3、运用实时荧光定量RT-PCR法比较体内生长组与不同小鼠胚胎体外培养组(M16、M16+TGF-β1 1ng／ml和M16+TGF-β1 10ng／ml组)扩张囊胚galectin-1表达水平的差异。结果：1、在小鼠胚胎培养基中加入TGF-β1可使小鼠胚胎早期囊胚、扩张囊胚和孵出囊胚形成率提高，并且与培养基中TGF-β1浓度呈一定剂量相关性，其中TGF-β1浓度为10ng／ml时对胚胎发育最有利，胚胎培养第68和92小时其早期囊胚、扩张囊胚和孵出囊胚率分别为15．6％，68．09％，1．42％和6．38％，28．37％，53．19％。当TGF-β1≥50ng／ml时对胚胎发育的促进作用减弱。2、在M16+TGF-β1 10ng／ml组胚胎培养第68时进行囊胚移植，受体鼠胚胎种植率明显高于M16组(35．42％vs 17．19％，P＜0．01)。3、M16+TGF-β1 10ng／ml组胚胎移植后第6天妊娠物体外培养上清液中IFN-γ水平低于M16组(30．89±11．31pg／ml vs 43．23±18．09pg／ml，P＜0．05)。4、小鼠体内生长囊胚galectin-1表达水平高于M16体外培养组(△Ct=1．75±0．87 vs 3．12±0．63，P＜0．05)；培养基中加入TGF-β1对体外培养小鼠胚胎galectin-1的表达无影响。结论：在小鼠胚胎体外培养系统中加入适宜浓度TGF-β1可有效提高体外培养小鼠胚胎移植后的胚胎种植率，其主要作用机制是通过提高体外培养胚胎质量和胚胎发育速率，改善胚胎发育与子宫内膜发育的同步性实现，并且可通过降低母胎界面IFN-γ水平，使Th1／Th2平衡向Th2偏移，进而促进妊娠的建立和维持。体内生长囊胚galectin-1表达水平高于体外培养囊胚，这可能是造成体外培养胚胎种植率低，流产率高的原因之一，但通过向小鼠胚胎体外培养基中加入TGF-β1不能提高galectin-1的表达。

全文目录


中英文缩写对照  5-6
中文摘要  6-8
英文摘要  8-11
前言  11-13
第一部分 TGF-β1对小鼠体外胚胎发育及胚胎种植的影响  13-35
  前言  13-14
  材料与方法  14-21
  结果  21-27
  讨论  27-31
  结论  31-32
  参考文献  32-35
第二部分 小鼠胚胎培养基中加入TGF-β1对母-胎界面IL-10/IFN-γ的影响  35-56
  前言  35-37
  材料与方法  37-43
  结果  43-45
  讨论  45-51
  结论  51-52
  参考文献  52-56
第三部分 体外培养及TGF-β1对小鼠胚胎galectin-1表达的影响  56-80
  前言  56-58
  实验材料与方法  58-67
  结果  67-72
  讨论  72-76
  结论  76-77
  参考文献  77-80
文献综述  80-107
  第一部分 TGF-β1在生殖医学领域研究进展  80-89
  参考文献  89-94
  第二部分 Galectin-1的生理功能  94-102
  参考文献  102-107
致谢  107

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中图分类: > 医药、卫生 > 妇产科学 > 产科学
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