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多疗程糖皮质激素治疗早产的临床评价及对胎盘11β-HSD2调控作用研究

作　者: 徐爱群
导　师: 曾蔚越
学　校: 四川大学
专　业: 妇产科学
关键词: 早产地塞米松糖皮质激素多疗程 11β-羟基类固醇脱氢酶2 糖皮质激素受体胎盘滋养细胞原代细胞培养
分类号: R714.21
类　型: 博士论文
年　份: 2007年
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内容摘要

背景早产是严重影响围生儿发病率和死亡率的重要原因，对于早产及时有效的治疗可以改善围生儿结局，提高出生人口素质。早产治疗中积极促胎肺成熟是基本原则，因此临床上常采用产前糖皮质激素治疗。其中单疗程糖皮质激素治疗效果肯定，副作用小，已被临床接受。但对于治疗1周后未分娩的早产孕妇，是否给予重复疗程糖皮质激素治疗，目前尚未达成共识。动物试验结果发现重复给予糖皮质激素能引起胎仔生长受限、神经发育迟缓等副作用，而对人的临床观察并不支持此观点。因此，对于产前重复糖皮质激素治疗的正确评价有着重要的临床意义。近年来，通过对胎儿印迹效应的研究发现，胎盘中存在糖皮质激素代谢的重要调节酶：11β-羟基类固醇脱氢酶(11β-hydroxysteroid dehydrogenase，11β-HSD)，其中11β-HSD2可以灭活有活性的糖皮质激素，从而起到保护胎儿的屏障作用。但是，临床重复糖皮质激素治疗后对于胎盘部位11β-HSD2表达有无影响，11β-HSD2是否起到积极的保护作用，尚未见报道。目的1、评价临床产前不同疗程糖皮质激素治疗早产后对母儿结局的近、远期影响；2、观察临床产前不同疗程糖皮质激素治疗后早产胎盘绒毛11β-HSD2和糖皮质激素受体(GR)的表达；3、探讨地塞米松对离体早产胎盘绒毛滋养细胞11β-HSD2和GR表达的影响。方法1、分析近六年在四川大学华西第二医院分娩的早产病例，根据产前是否接受糖皮质激素(GC)治疗及疗程，分为：未用组、不足1疗程组、1疗程组、2疗程组和3疗程及以上组；记录早产儿出生体重、身长、Apgar评分及近期并发症，并随访1～7年体格发育、神经和智力发育及运动功能等，通过多因素Logistic回归分析评价重复疗程糖皮质激素治疗对早产儿结局的影响。2、收集临床分娩的早产胎盘，根据产前接受糖皮质激素治疗与否及疗程同前分组。通过SYBR GreenⅠ荧光染料定量PCR方法检测各组胎盘绒毛11β-HSD2和GR mRNA表达，并用免疫组化方法检测胎盘绒毛11β-HSD2和GR蛋白。3、收集早产分娩胎盘，通过酶消化法和组织块培养法进行原代绒毛滋养细胞培养，对于获得的滋养细胞进行纯化、鉴定；用地塞米松(100nM)体外模拟两疗程GC给药干预原代培养的绒毛滋养细胞，通过SYBR GreenⅠ荧光染料定量PCR方法检测用药后1～7d每天滋养细胞11β-HSD2和GR mRNA表达情况，并用Western blot免疫印迹法检测胎盘绒毛11β-HSD2和GR蛋白表达；此外在地塞米松干预的同时加入RU486(1μM)共同作用检测每天滋养细胞11β-HSD2和GR的蛋白和mRNA表达情况。结果1、四川大学华西第二医院近6年间住院病人早产发生率4.6％；胎膜早破是导致早产的最主要原因，占36.0％；新生儿出生体重和身长Z积分，GC治疗组与对照组间无显著性差异(P＞0.05)，不同疗程GC治疗组间比较无显著性差异(P＞0.05)；产前2疗程GC治疗后早产儿1minApgar≤7分发生风险降低(OR，0.57；95％CI，0.35～0.92)，3疗程治疗后亦降低(OR，0.10；95％CI，0.01～0.74)；产前2疗程GC治疗后早产儿5minApgar≤7分发生风险降低(OR，0.13；95％CI，0.03～0.43)；2疗程GC治疗后婴幼儿死亡风险下降(OR，0.18；95％CI，0.04～0.87)；GC治疗组母儿感染发病率与对照组无明显差异。2、免疫组织化学染色法可见胎盘绒毛部位有11β-HSD2和GR蛋白表达；SYBR GreenⅠ荧光染料定量PCR法检测未使用糖皮质激素组(对照组)胎盘11β-HSD2 mRNA表达低于使用糖皮质激素组(P＜0.05)，各疗程激素治疗组表达均高于对照组(P＜0.05)，各疗程激素治疗组间比较无差异(P＞0.05)；胎盘GR mRNA表达在各疗程激素治疗组与对照组及各激素治疗组间表达比较无差异(P＞0.05)；免疫组化检测结果与荧光定量PCR法结果一致。3、通过酶消化法结合组织块培养法，可以获取高纯度的早产阶段晚孕胎盘滋养细胞；SYBR GreenⅠ荧光染色定量PCR法可在体外培养滋养细胞检测到11β-HSD2和GR mRNA表达；Western blot可在体外培养滋养细胞检测到11β-HSD2和GR蛋白表达；DEX干预原代培养滋养细胞，培养1d后11β-HSD2 mRNA表达开始上升，第2d和第3d继续升高(P＜0.05)，第4d改为无药物培养液后表达明显下降，第5d～7d重复给药后再次升高(P＜0.05)；在地塞米松干预的同时加入RU486(1μM)共同作用，可见每天滋养细胞11β-HSD2和GR的蛋白和mRNA表达有所下降(P＞0.05)；Western blot检测结果与荧光定量PCR法一致。结论：1、临床资料显示重复疗程GC治疗可以降低早产儿低Apgar评分发生，具有促胎肺成熟作用；同时并未降低出生胎儿体重和身长，未影响婴幼儿生长发育和增加母儿感染发生。因此重复产前糖皮质激素治疗利大于弊，可在临床中继续使用；2、产前给予早产孕妇糖皮质激素治疗可以刺激胎盘11β-HSD2表达，但对GR表达无明显改变，此效应不随疗程增加而变化，表明胎盘滋养细胞在DEX刺激下具有调节11β-HSD2能力，并且此能力不因临床GC疗程增加而减弱，因此参与对胎儿的屏障保护作用；3、酶消化法结合组织块培养法，可以从轻度早产胎盘上获取高纯度的胎盘滋养细胞；重复给予DEX具有刺激原代培养的胎盘绒毛滋养细胞增加11β-HSD2蛋白和mRNA表达的作用；联合RU486用药后可以抑制此刺激作用，但作用有限；重复给予DEX并不能明显下调原代培养的滋养细胞的GR水平；说明原代培养的滋养细胞可以通过调节11β-HSD2表达起到保护胎儿的屏障作用，尚不能排除GR参与DEX对滋养细胞11β-HSD2的调节过程。

全文目录

中英文缩略词对照  5-6
中文摘要  6-9
英文摘要  9-13
前言  13-16
参考文献  16-19
第一部分不同疗程糖皮质激素治疗早产临床效果分析  19-43
  资料和方法  19-22
  结果  22-34
  讨论  34-38
  小结  38-40
  参考文献  40-43
第二部分多疗程糖皮质激素治疗对早产胎盘11β-HSD2表达影响的研究  43-64
  材料和方法  43-49
  结果  49-57
  讨论  57-61
  小结  61-62
  参考文献  62-64
第三部分地塞米松对离体胎盘绒毛滋养细胞11β-HSD2表达的影响研究  64-88
  材料和方法  64-72
  结果  72-82
  讨论  82-84
  小结  84-86
  参考文献  86-88
文献综述一  88-112
  多疗程糖皮质激素治疗早产临床评价及研究进展  88-106
  参考文献  106-112
文献综述二  112-139
  11β-HSD2与糖皮质激素在产科中研究进展  112-130
  参考文献  130-139
博士在读期间发表文章  139-140
致谢  140

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