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一个新的KRAB锌指蛋白ZNF333的功能研究

作　者: 陈冀榛
导　师: 黄尚志；谢久永
学　校: 中国协和医科大学
专　业: 医学遗传学
关键词: ZNF333 KRAB锌指蛋白选择性剪接剪接子共抑制子KAP-1 哺乳动物单杂交系统转录抑制活性 GAL4DBD
分类号: Q51
类　型: 博士论文
年　份: 2003年
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内容摘要

我们在多指(趾)家系相关基因的关键区域内(19p13.1)鉴定了一个新的锌指蛋白基因ZNF333 cDNA。该基因与KRAB型锌指蛋白具有同源性，在C端存在锌指基序，在N-末端有两个KRAB结构域，并有多个磷酸化位点。ZNF333基因有两个剪接子，长剪接子含有两个KRAB结构域及锌指基序。短剪接子仅含有一个KRAB结构域，无锌指基序。两个剪接子的免疫荧光定位研究显示均定位于核内，提示定位不依赖DNA结合序列；两者的分布特点不同，长剪接子呈斑点状散布于核中，短剪接子呈斑块状在核中，可能在核仁区。当两者共表达时，长剪接子明显改变了定位及分布特点，并与短剪接子共定位。为了深入研究ZNF333的功能，通过构建一系列ZNF333的N末端缺失重组子，利用哺乳细胞单杂交系统研究其对转录的影响。在HEK293细胞中，KRAB2结构域呈现了明显的转录抑制活性，而KRAB1结构域和两个间隔区未发现转录抑制活性。将KRAB2结构域中的高度保守的氨基酸DV替换变成AA，突变后的KRAB2失去转录抑制活性。而这两个氨基酸被认为是与共抑制子KAP-1结合的关键氨基酸。我们还分析了KRAB-2A和KRAB-2B对转录抑制的影响，结果发现KRAB-2B不发挥转录抑制活性的作用。为了进一步分析ZNF333发挥转录抑制活性是否具有细胞特异性，我们用哺乳细胞单杂交系统检测了HET293、Hela、HR8348、K562、Jurkat和HepG2六种细胞系。在Jurkat细胞中KRAB-1A和KRAB-2A一样发挥转录抑制活性，而在Hela、HR3848、HepG2和HEK293细胞系中，KRAB-1A不发挥作用。并且KRAB-2A发挥作用的水平也有很大差异，这种差异很有可能与ZNF333相作用的不同的共抑制子表达水平有关。

全文目录

中文摘要  3-5
英文摘要  5-7
缩略语表  7-9
前言  9-11
材料与方法  11-36
实验结果  36-60
讨论  60-67
小结  67-73
参考文献  73-77
文献综述  77-87
致谢  87

一个新的KRAB锌指蛋白ZNF333的功能研究

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