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蛙皮素对人胃粘膜上皮永生细胞系cyclin D1/CDK4的影响及在化学癌变中的作用初探

作　者: 李景南
导　师: 陈元方；钱家鸣；陈原稼
学　校: 中国协和医科大学
专　业: 消化内科
关键词: 蛙皮素促生长作用细胞周期蛋白依赖性激酶永生细胞系胃肠激素细胞周期调控受体拮抗剂细胞生长表皮生长因子化学致癌剂
分类号: R573
类　型: 博士论文
年　份: 1999年
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内容摘要

胃肠肽类激素的生长因子样效应对生长发育和肿瘤的影响已成为近年来研究的热点。蛙皮素(Bombensin)是由14个氨基酸组成的具有生长因子样作用的胃肠肽，对多种细胞和组织都有营养作用，尤其是对肿瘤细胞的促生长作用逐渐引起人们的关注。蛙皮素促进细胞生长及细胞转化的许多机制尚不清楚，与细胞周期调控因子之间的关系亦未见报道。本研究目的在于确证蛙皮素对正常胃粘膜上皮细胞的促生长作用及研究蛙皮素与细胞周期调控因子Cyclin D1和CDK4的关系，以期探索其促生长作用的机制，并在此基础上观察蛙皮素在化学致癌剂甲基硝基亚硝基胍(MNNG)诱发细胞癌变过程中的作用。实验方法：用人胃粘膜上皮永生细胞株GES-1，采用MTT实验作为增殖指标，研究蛙皮素及受体拮抗剂([D-phe~6]BN(6-13)methyl ester)对GES-1细胞增殖的影响；用流式细胞仪观察不同浓度蛙皮素、相同浓度不同作用时间及蛙皮素与受体拮抗剂共同作用等不同条件对GES-1细胞cyclin D1表达的影响；利用Westem印迹和增强化学发光剂(ECL)自显影观察了蛙皮素对GES-1细胞作用不同时间后CDK4蛋白表达的变化；利用Sepharose微珠免疫沉淀方法检测蛙皮素作用不同时间对GES-1细胞CDK4活性的影响。在此基础上，我们使蛙皮素与化学致癌剂(MNNG)共同作用，观察经不同处理后各组细胞在光镜和电镜下的形态学改变、软

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英语缩写  4-6
中文摘要  6-9
英语摘要  9-12
前言  12-15
材料  15-22
方法  22-30
  一.蛙皮素对GES-1细胞生长的影响  22
  二.蛙皮素对GES-1细胞cyclin D1表达的影响  22-24
  三.蛙皮素对GES-1细胞CDK4蛋白表达的影响  24-25
  四.蛙皮素对GES-1细胞CDK4蛋白活性的影响  25-27
  五.蛙皮素在GES-1细胞化学致癌中的作用  27-30
结果  30-49
  一.蛙皮素、蛙皮素拮抗剂对GES-1细胞生长的影响  30-32
  二.蛙皮素对GES-1细胞cyclin D1表达的影响  32-37
  三.蛙皮素对GES-1细胞CDK4表达的影响  37-38
  四.蛙皮素对GES-1细胞CDK4表达的影响  38-39
  五.蛙皮素和MNNG作用后各组细胞增殖速度比较  39-40
  六.蛙皮素和MNNG作用后各组细胞Cyclin D1表达的变化  40-43
  七.蛙皮素和MNNG作用后各组细胞软琼脂生长的比较  43-44
  八.蛙皮素和MNNG作用后各组细胞的形态学改变  44-49
附表  49-53
讨论  53-61
小结  61-62
参考文献  62-70
综述  70-95
致谢  95

蛙皮素对人胃粘膜上皮永生细胞系cyclin D1/CDK4的影响及在化学癌变中的作用初探

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