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趾长伸肌和比目鱼肌运动神经元群递/调质的不同配布式样及其树突的发育可塑性研究

作　者: 石葛明
导　师: 万选才
学　校: 中国协和医科大学
专　业: 神经生物学
关键词: 树突神经元雄激素胶体金可塑性比目鱼式样解剖学感觉神经面神经
分类号: Q954.6
类　型: 博士论文
年　份: 1996年
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内容摘要

本论文通过创建一种新的逆行标认神经元复合免疫细胞化学（ICC）的非荧光双标技术，对降钙素基因相关肽（CGRP）在快肌（EDL）Mn群和慢肌（SOL）Mn群的配布式样及可塑性进行了较详细的研究；并以CB—HRP为探针，对所标认的EDL Mn群和SOL Mn群的树突发育，尤其是对其脊髓白质树突（WMD）的功能解剖学意义进行了探讨，首次发现了雄激素对普通躯体Mn尤其是对EDL Mn的树突发育增长具有明显的促进作用；论文并对蛛网膜下腔注射Bay K8644、Dynophin A（1—17）（Dyn）后引起EDL、SOL Mn树突损伤的不同易感性进行了探讨。全文共分三个方面，10个部分进行了实验研究一．霍乱毒素B亚单位结合胶体金（CB—Au）的逆行轴浆转运及其在实验神经解剖学研究中的应用： 1．CB—Au作为逆行示踪剂的研究：本实验通过制备三种不同直径的胶体金颗粒（5nm，10nm，15nm），在与霍乱毒素B亚单位（CB）偶联后（即CB—Au），注射于大鼠神经系统的不同部位，观察CB—Au作为逆行示踪剂的可行性，神经元通常不能摄取单纯的胶体金，但在与CB偶联后，由于神经轴膜上GM₁受体与配基CB的结合，通过受体介导内吞作用，胶体金即可被神经末稍摄取并逆行转运入胞体，以银加强方法可显示被转运的胶体金颗粒，光镜下呈黑色致密的颗粒，该方法优点在于标记颗粒的背景无色；注射靶位扩散范围小，定位准确；显色方法简单不受固定液成分和浓度的影响；胶体金在神经元内贮留时间长（至少可达35天）；显色后的标记物不褪色并可复染；对三种直径的CB—Au转运的研究表明5nm和10nm的CB—Au最适用于周围神经系统的示踪标认，而5、10和15nm CB—Au均可用于中枢神经系统的神经元示踪标认，电镜下，摄取后的CB—Au主要滞留于溶酶体内，而与CB—HRP在神经元内的转运行为不同，提示CB—Au进入胞体后即已分离，银加强只显示分离的Au。 2．CB—Au特定标认神经元复合ICC——一种新的非荧光双标方法的建立特定递质的标认神经元群是否具有递／调质不同配布式样，应用传统的荧光或酶标配基复合ICC双标方法较难确认这一问题，银加强过程简易，经处理的CB—Au逆行标认神经元背景无色，这些均很有利于复合ICC，这种非荧光双标技术的实验结果显示出的双标记产物，一种呈黑色颗粒（CB—Au），一种为黄棕色均匀一致的斑块状（ICC DAB产物）二者反差大，易于识别，所有CB—Au标记神经元的ICC性质都可清晰确定，绝无酶标示踪剂完全覆盖神经元以致无法判断是否为双标性质的情形，标本可反复观察，反应产物不褪色，并可进行复染了解与其它神经元之间的关系。

全文目录

英文缩写表  19-20
中文摘要  20-25
英文摘要  25-32
文献综述一：降钙素基因相关肽在运动神经元的表达及可塑性变化  32-46
  一、概述  32
  二、CGRP—LI在脊髓的分布方式及背角CGRP的来源  32-33
  三、运动神经元CGRP表达的不均一性  33-34
  四、运动神经元轴突损伤对CGRP表达的影响及时程变化  34-38
  五、其它影响CGRP在Mn表达的因素  38
  六、CGRP与与神经肌接头(NMJ)的关系  38-40
  七、Mn CGRP与细胞死亡的关系  40
  八、CGRP在Mn所起的作用  40-41
  九、与CGRP在Mn共存的其它神经活性物质  41-46
文献综述二：雄激素对脊髓运动神经元发育的影响  46-50
  一．概述  46
  二．大鼠腰髓性别双态运动神经元核团的一般解剖学特点及其出现原因  46-47
  三．雄激素控制着SNB及DLN核团的发育  47-49
  四．雄激素对SNB、DLN Mn树突发育的影响  49-50
前言  50-51
第一部分．霍乱毒素B亚单位结合胶体金的逆行轴浆转运及在实验神经解剖学研究中的应用  51-65
  材料和方法  52-54
    一、CB—Au的制备  52
    二、CB—Au用于神经元示踪的动物实验  52-54
  结果  54-57
    一．CB—Au对神经元的逆行标记  54-55
    二．不同存活期CB—Au及WGA—Au对运动神经元标记效果的比较  55-56
    三．CB—Au的逆行轴浆转运复合ICC的非荧光双标记  56-57
    四．神经元双投射的非荧光双标观察  57
    五．CB—Au的转运行为的电镜观察  57
    六．CB—Au与CB—HRP注射点扩散范围大小的比较  57
  讨论  57-65
    一．CB—Au的逆行轴浆转运  57-58
    二、CB—Au特定标认神经元复合免疫细胞化学——一种新的非荧光双标记方法  58
    三．迷走运动背核、面神经核的脊髓投射  58-65
第二部分．大鼠SOL、EDL两种不同功能运动神经元群调质CGRP配布式样分析及其可塑性研究  65-88
  材料和方法  65-68
    一．主要药品及试剂  65
    二．特定神经元群的标认方法  65
    三．标本的固定和材料的处理  65-66
    四．神经元特定标认复合ICC双标方法  66
    五．NOS与CGRP双标方法  66
    六．实验分组  66-68
    七．标认Mn CGRP—LI含量强度的半定量分析  68
    八．统计学处理  68
  结果  68-72
    一．CGRP在SOL、EDL Mn群的配布式样及其发育变化  68-69
    二．靶肌肉对Mn CGRP表达的影响  69-71
    三．脑室内注射5,7—DHT对SOL、EDL Mn群CGRP—LI含量的影响  71
    四．运动神经元严重受损对CGRP—LI的影响  71-72
  讨论  72-75
    一．Mn CGRP—LI含量的不均一性及在不同Mn群的配布式样  72-73
    二．靶肌肉切除及腱离断对Mn CGRP—LI含量的影响  73-74
    三．5,7—DHT调节不同Mn群CGRP的表达  74-75
    四：运动神经元严重受损时CGRP—LI的变化  75
  小结  75-88
第三部分．大鼠EDL、SOL二种不同功能Mn群的树突发育及可塑性研究  88-147
  材料及方法  88-90
    一．动物及药品  88-89
    二．运动神经元的特定标认  89
    三．动物固定及切片处理  89
    四．组化成色  89
    五．实验分组  89-90
    六．形态测量  90
    七．数据处理  90
  结果  90-98
    一．标认EDL Mn及SOL Mn群的位置  90
    二．EDL Mn及SOL Mn群的树突发育  90-93
      一)．EDL Mn及SOL Mn群树突发育的一般形态学观察  91-92
      二)．EDL Mn及SOL Mn树突发育的定量研究  92-93
    三．雄激素对EDL Mn及SOL Mn群树突发育的影响  93-97
      一)．雄激素对EDL Mn及SOL Mn群树突发育影响的一般观察  93-94
      二)．雄激素对EDL Mn及SOL Mn树突发育影响的定量分析  94-97
    四．EDL Mn及SOL Mn群树突损伤实验  97-98
      一)．Bay K8644对EDL Mn及SOL Mn群树突的影响  97
      二)．强啡肽对EDL Mn及SOL Mn群树突的影响  97-98
  讨论  98-105
    一．EDL Mn群及SOL Mn群的正常发育  98-100
      (一)．EDL Mn及SOL Mn群树突野的发育  98-99
      (二)．EDL Mn及SOL Mn细胞柱树突束的发育  99-100
    二．雄激素对EDL Mn及SOL Mn群树突发育的影响  100-102
    三．雄激素是否影响CB—HRP在Mn的转运  102
    四．嫌高尔基树突的再论证及其存在的意义  102-103
    五．Mn与脑脊液及小血管的关系  103-104
    六．EDL Mn及SOL Mn群树突损伤实验  104-105
  小结  105-147
总结  147-148
发表的文章及文摘  148-149
致谢  149
参考文献  149-164
  Ⅰ．综述一、论文二参考文献  149-158
  Ⅱ．综述二参考文献  158-159
  Ⅲ．论文一参考文献  159-160
  Ⅳ．论文三参考文献  160-164
个人简历  164

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