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高血压和肾病综合征基因治疗的实验研究

作　者: 李涛
导　师: 卢圣栋
学　校: 中国协和医科大学
专　业: 生化及分子生物学
关键词: 体细胞基因治疗 博士学位论文 外源基因 医科大学 表达水平 重组体 利尿作用 协和 多基因疾病 自发性高血压大鼠
分类号: R692.3;Q789
类　型: 博士论文
年　份: 1998年
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内容摘要


为探讨多基因疾病基因治疗的可行性，我们在体细胞基因治疗的基础上提出了开展多基因疾病表型基因治疗的设想，即主要针对疾病的症状而忽视其遗传基础的基因治疗方法。就象在体内建立一座微型药厂，它可以源源不断地为患者提供基因药物。这对于基因产品，尤其是半寿期极短的小分子物质尤为有用。如果该方法可行，将大大提高基因治疗的适应性和灵活性。 为检验这种设想是否合理、可行，我们以具有利尿、利纳和降低血压作用等广泛作用的心钠素(atrial natriuretic peptide，ANP)作为功能基因，以具有相关症状的自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rat，SHR)和肾病综合征(nephrotic syndrome，NS)动物模型作为研究的初始对象，用基因治疗的原理和方法首次对经体细胞转移后的ANP的生理作用进行了研究。最后在SHR大鼠体内观察到了明显的降压和利尿作用，在NS大鼠体内观察到了明显的利尿作用。在此项工作的过程中，首次发现了一种特殊的人体细胞(HEFT)。该细胞不仅在体外培养时可以高水平地表达、分泌人的ANP(hANP)，而且在用胶原法对SHR大鼠进行异种移植后，同样观察到了明显的降压作用。本工作的主要内容和结果如下： 1、rANP逆转录病毒表达重组体的构建 为筛选rANP高水平表达的重组体，利用DNA重组技术对rANP基因与逆转录病毒载体的内部启动子5’LTR、巨细胞病毒启动子CMVp以及血管紧张素原的启动子ATp进行了重组，获得了四种rANP表达重组体，分别是pLT61、pLT62、pLT8和pLT9。 2、PA317包装细胞系的转染 为了给基因治疗提供能持续分泌携带有rANP基因的重组缺陷型逆转录病毒颗粒的产毒细胞系，采用脂质体介导法把重组体pLT61、pLT62、pLT8和pLT9分别转染进PA317包装细胞，用G418筛选抗性细胞克隆，扩增并测定病毒滴度，用放射免疫学方法(RIA)检测rANP的表达、分泌情况，保存表达水平较高的克隆PA317／pLT61和PA317／pLT8。

全文目录


中文摘要  5-8
英文摘要  8-12
综述一  12-26
综述二  26-59
高血压和肾病综合征基因治疗的实验研究  59-149
  前言  59-63
  论文第一部分rANP基因的导人  63-124
    一、高血压的基因治疗  63-113
      材料  65-72
      实验方法  72-82
      结果  82-106
      讨论  106-113
    二、肾病综合征的基因治疗  113-124
      材料  113-114
      实验方法  114-116
      结果  116-120
      讨论  120-124
  论文第二部分hANP的基因治疗(走向临床)  124-149
    材料  125
    实验方法  125-138
    结果  138-147
    讨论  147-149
总结  149-153
参考文献  153-173
致谢  173

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中图分类: > 生物科学 > 分子生物学 > 基因工程（遗传工程） > 基因工程的应用
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