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间日疟原虫裂殖子表面蛋白1（PvMSP-1）基因多态性研究

作　者: 张山鹰
导　师: 陆惠民
学　校: 苏州大学
专　业: 病原生物学
关键词: 间日疟原虫裂殖子表面蛋白1 等位基因型流行病学聚合酶练式反应
分类号: R383
类　型: 博士论文
年　份: 2004年
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内容摘要

目的研究我国不同疟疾流行区间日疟原虫裂殖子表面蛋白1(PvMSP-1)基因序列特征，探索PvMSP-1等位基因型及其地理分布，不同等位基因型与疟疾流行特征的关系，评价PvMSP-1作为分子标志在疟疾分子流行病学调查中的意义及应用前景。方法选择代表我国不同地理环境和流行特征的间日疟流行区调查点，设计疟疾个案调查表，收集疟疾流行病学资料，采集间日疟病人血液样本供基因检测；根据PvMSP-1基因序列特征设计特异性引物，用套式PCR扩增ICB5-ICB6多态区包含Belem株的PolyQ大约500bp大小的DNA片段，PCR产物纯化并进行序列测定，通过GenBank进行序列比对，用基因软件分析基因型，结合限制性片段长度多态性(RFLP)技术进行基因型鉴定，建立一套适用的基因型鉴定方法，并应用于福建省输入性疟疾的追踪调查和暴发点性质判断；另一个重要分子标志环子孢子蛋白(CSP)基因对比分析我国间日疟原虫分离株基因多态性特征；观察不同PvMSP-1基因型生物学形态差异。结果① 82份间日疟原虫现场分离株扩增出470bp片段50份，400bp片段39份，其中7份为两种片段的混合型。海南分离株混合型为20％(6／30)，平均克隆数为1.20(36／30)，安徽分离株混合型仅为2.3％，平均克隆数1.02。对33份样本进行序列测定，Sal-1型17份，Belem型2份，12份重组型(Ⅲ型)和朝鲜型2份为我国新发现基因型。② 98份间日疟血样经套式PCR扩增均出现大小约为400bp(Belem型)或470bp(Sal-1型)的特异性片段。酶切消化后，45份470bp的样本出现120bp和350bp酶切片段，为Sal-1型；40份400bp的样本中3份仅出现一条400bp片段为Belem型，35份出现120bp和280bp两种酶切片段为Ⅲ重组型，2份120bp和240bp片段，应为朝鲜型。选择部分代表不同酶切图谱基因型样本的PCR产物进行测序鉴定，结果与PCR-RFLP结果完全符合，该技术成本低，操作方便快捷，结果可靠。③ 16例镜检确诊的间日疟病人血样经套式PCR-RFLP检测，7例属Sal-1型，1份为Belem型，8份为重组Ⅲ型。对其中7份样本PCR产物进行DNA直接测序，发现没有2个DNA序列是间臼疟原虫裂殖子表面蛋白基因多态性研究中文摘要完全相同的，通过DNA序列搜索结合流行病学调查可确定这些病例为输入性的，可初步判断其感染来源。④对海南省疟区32份样本同时用MSP一1和CSP分子标志进行分析，PvMSP一基因混合感染率为1 8.跳，平均克隆数为1 .16;PvCSP混合感染率为35.3%，平均克隆数为147，同时考虑两种标志则不同基因型混合感染率为50%，应用SPSS软件包进行对应分析发现热带族与S:，1一1型关系密切，Pvn型与重组111型分布靠近，其它基因型分布较为分散。⑤显微镜观察72份血片，均找到典型间日疟原虫，以滋养体为主，一般形态学观察Belel。型和Sal一1型无明显差异，用测微尺测量环状体Belem型环状体大小平均大于Sal二型，海南分离株红细胞感染两个以上疟原虫多见，Belem型为22.2%，Sal一l型为n.瑞，安徽分离株无发现此现象。结论我国间日疟原虫尸vMSp一1存在4种不同的等位基因型，以Sal一1型和重组.型(111型)占优势，南部疟区多克隆感染常见，基因型比北部复杂。PvMSP且基因可卜作为重要分子标志用于疟疾流行病学调查、病原追踪、流行特征判断和疫情的预测预报，两种以1二分子标志综合应用可更好地分析、了解疟疾流行规律。

全文目录

一、中文摘要  3-5
二、英文摘要  5-20
三、序言  20-26
四、论文正文  26-65
  第一部分我国不同疟区间日疟原虫裂殖子表面蛋白1(PVMSP-1)基因多态性研究  26-37
  第二部分套式聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术检测间日疟原虫中国分离株基因型  37-45
  第三部分用间日疟原虫裂殖子表面蛋白1(PvMSP-1)基因序列分析福建输入性疟疾病例  45-53
  第四部分用PvMSP-1和PvCSP分子标志分析间日疟原虫遗传多样性  53-60
  第五部分间日疟原虫裂殖子表面蛋白-1(PvMSP-1)不同等位基因型形态观察  60-65
五、结论  65-67
四、参考文献  67-78
五、综述  78-87
六、攻读学位期间本人公开发表的论文  87-88
七、附录  88-100
八、致谢  100

间日疟原虫裂殖子表面蛋白1（PvMSP-1）基因多态性研究

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