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过敏性哮喘中Eotaxin及CCR3致气道炎症机制的研究

作　者: 于化鹏
导　师: 戚好文
学　校: 第四军医大学
专　业: 内科学（呼吸系病）
关键词: 支气管哮喘气道炎症嗜嗜酸粒细胞 TM1细胞 TH2细胞嗜酸粒细胞阳性蛋白嗜酸粒细胞趋化因子 CCR3受体 P物质受体 5-羟色胺受体-血清总IgE 白介素1β
分类号: R562.25
类　型: 博士论文
年　份: 2001年
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内容摘要

气道炎症是支气管哮喘的病理变化基础，主要特征是嗜酸性粒细胞、淋巴细胞、肥大细胞浸润引起的气道粘膜水肿、黏液分泌和平滑肌痉挛。支气管哮喘气道的炎症反应分为速发相和迟发相。速发相主要是抗原通过IgE引起的嗜碱性粒细胞、肥大细胞的颗粒释放。迟发相则是由于嗜酸性粒细胞、淋巴细胞等引起的气道慢性炎症，是气道高反应性、哮喘反复发作的病理基础。炎性细胞特别是嗜酸性粒细胞、淋巴细胞的气管黏膜聚集、浸润，有赖于趋化因子的作用。以往认为PAF、LT_B4、C5a等发挥了重要作用。但是，目前认为趋化因子，特别是嗜酸性粒细胞的趋化因子如Eotaxin、RANTES、MIF-1α等的地位更为重要。本研究分为三个部分，重点探讨气道炎症机制及与Eotaxin及Eotaxin受体CCR3、P-物质受体、五羟色胺受体、血IgE的关系。第一部分：抗原及炎前介质IL-1β致气道炎症改变的机理1．卵蛋白致哮喘豚鼠气道炎症的变化方法：（1）以卵蛋白致敏及诱发豚鼠哮喘，分为哮喘组（n=11）、对照组（n=10）和地塞米松治疗组（n=10）；（2）收集支气管肺泡灌洗液（BALF）并进行细胞分类计数；（3）制备豚鼠肺组织标本；（4）进行HE染色，普通光学显微镜及电子显微镜下观察气道超微结构的变化；（5）免疫组化技术观察ECP在气道粘膜中的表达。结果：（1）抗原诱发哮喘豚鼠的气道黏膜充血、水肿、上皮损伤、脱落。气道的炎症变化生要为嗜酸性粒细胞和淋巴细胞的浸润；（2）豚鼠BALF中EOS明显增多；（3）电镜观察支气管粘膜损伤，肺间质中可见EOS并处于脱颗粒状态，颗粒内有结晶体；（4）豚鼠气管黏膜及周围组织中ECP表达明显增强，EOS活化；糖皮质激素可抑制气道炎症、酸性粒细胞脱颗粒、ECP表达。结论：过敏性哮喘是一种以嗜酸性粒细胞浸润为主要表现的气道炎症，这种炎症与抗原的激发有密切关系。糖皮质激素明显抑制气道炎症。2．ILIp致大白鼠气道炎症改变的观察方法：＊)以 SD大白鼠为实验观察对象，分为几－lp组（n＝6）和正常对照组＊畸人给予大鼠尾静脉注入儿1 Q50 u g从g)，6小时后淋醉取肺组织并进行肺冲洗和快速冰冻处理；（2）采用HE染色，观察大鼠肋组织中的气道炎症变化；（3）采用免疫组化技术观察肺组织中P物质受体（SPR）和 5．羟色胺受体（5－HTZAR）的变化。结呆：（！）！LI6注射纵大白鼠可见支气管粘膜水肿，管壁增厚，粘膜下炎性细胞的浸润。对照组肺组织正常，未见气管瓢膜水肿、渗出增加等。（2）采用免疫组化方法染色，可见u．I6组大白鼠气管粘膜下 Sng 5．HTZAR表达明显增强，主要位于支气管粘膜下及少量小静脉壁上，动脉及肺泡未见表达。汇常对照组的支气管瞄膜则很少表达 Sng 5爿。结论：（l）IL－lp可引起气道炎症改变，其可能是引起气道炎症的重要炎前介质；（2门刁可促进气道粘膜表达炎性介质受体，有利于炎性介质的作用和炎症的发展。第二部分过敏性哮喘豚鼠气道中 Eotaxin及CCR3 mRNA的表达及意义方法：门）采用原位分子杂交，Northern杂交、斑点杂交等人法观紫舢纠织中Eotaxin及其受体CCR3的表达：（2）提耿帅组织总RNA，对CCR3受体基因进行反转录PCR，并对获得的。DNA片段进行克隆测序。结果：（！）哮喘豚鼠肺组织中Eotaxin及其受体CCR3 mRNA表达明显增强，井与ECP呈正相关；C)糖皮质激素对Eotaxin、CCR3，mRNA的表达有明显抑制作用，对＊＊P的表达也有明显抑制作用：侣)豚鼠＊＊m受体测序结果与国外文献报导一致。结论：（！）哮喘发作过程中，气道粘膜中Eotaxin及CCR3基因表达显著增高，并与嗜酸性粒细胞释放产物ECP呈小相关。说明Eotax＊通过其受体在气道炎症中发挥作用；o)糖皮质激素抑制Eotaxin、CCR3的基因表达及作用；（3）测得CCR3基因序列与国外文献一致，说明实验哮喘动物模型中表达的Eotaxin受体确是CCR3受体，证实了CCR3为Eotaxin发挥作用的必经途径。策三部分过欧性哮喻痛人中Eotaxiu与THlrrHz关系的研究方法：＊)以过敏性哮喘病人为实验对象，分为三组：急性发作朔组＊叫5人－4· 稳定期组（n＝14）、if：常对照组（n＝9）。（2）分别收集血液，分离淋巴细胞。采用流式细胞仪技术观察哮喘谣者外周血中淋巴细胞内IFN－Y、儿A及 Eotaxin k达，问时观察血消总IgE和呼气峰流速变异率。结果：（）支 ’(符啤喘病人发作则【。taxin阳件细胞表达率较稳定期病人明孤升高（P＜O．05），山较对照组病人明raf升高（P＜0刀1）；（2）D＊－Y阳性细胞表达率，急什发作J附卜札汝高十稳定期组（卜0刀1）及对照织（k0刀】），稳定川1川‘村照纠（卜0刀1）；（3）1卜4阳忏细胞表达率，急件发作1毗I ！．J共，l 厂稳定！（＊＜0刀】）从＊且正（＊＜0刀1）：（4）血5．｝g屹E水且，0 件发作则纠！．；以，一门’稳定川］叩

全文目录

中英文名词对照与缩写  3-5
中文摘要  5-8
英文摘要  8-11
前言  11-14
第一部分抗原及炎前介质IL-1β致气道炎症改变的机理  14-34
  第一节卵蛋白致哮喘豚鼠气道炎症的变化  14-27
  第二节 IL-1β致大白鼠气道炎症改变的观察  27-34
第二部分过敏性哮喘豚鼠气道中Eotaxin及CCR3 mRNA的表达及意义  34-57
第三部分过敏性哮喘病人中Eotaxin与TH1/TH2关系的研究  57-72
小结  72-74
致谢  74-75
综述一：嗜酸性粒细胞及趋化因子研究进展  75-88
综述二：细胞因子受体与哮喘关系研究进展  88-93
附图说明  93-113
博士期间发表文章目录  113

过敏性哮喘中Eotaxin及CCR3致气道炎症机制的研究

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