学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

EGb761对脑缺血再灌注后大鼠中脑胶质细胞和多巴胺神经元的影响

作　者: 段周芳
导　师: 王金兰
学　校: 郑州大学
专　业: 神经内科
关键词: 标准银杏叶提取物脑缺血再灌注神经胶质细胞酪氨酸羟化酶 TUNEL 大鼠
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 23次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

背景和目的缺血性脑血管病是严重危害人类健康的常见病、多发病之一,具有高发病率、高致残率、高致死率的特点。目前关于缺血性脑血管病的研究主要集中在缺血梗死灶的局部,而对与缺血梗死相关联的脑组织、细胞的损伤研究较少。近年来,有研究表明,脑梗死治疗效果差的原因不仅与梗死灶局部神经元死亡密切相关,与远隔部位损伤也有着不容忽视的作用,且可能影响脑梗死的预后。胶质源性纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein, GFAP)是星形胶质细胞的一种主要中间纤维蛋白,被作为星形胶质细胞成熟活化的标志蛋白,其表达数目增加一定程度上反映了脑组织受损的程度。酪氨酸羟化酶(Tyrosine of enzyme, TH)在中脑的黑质致密部分布密度最高,被用来标志脑内多巴胺能神经元,TH活性的下降,DA合成减少,进而DA能神经元细胞变性、坏死,还增加细胞外源性毒物的敏感性,加重脑组织损害。因此,黑质内TH阳性细胞计数可以间接反映DA能神经元功能的变化。标准银杏叶提取物(Ginkgo biloba extract, EGb761),主要含24%的银杏黄酮苷(flavonoid)和6%的萜烯内酯(terpenoid)等多种活性物质。EGb761在脑缺血时对神经元保护作用的研究较多,而其对神经胶质细胞抗缺血损伤作用的研究却很少受到关注,其对远隔部位损伤方面的保护作用及其机制尚不清楚。本研究通过建立大鼠大脑中动脉内栓线阻断法(MCAO)脑梗死模型,探讨急性脑缺血再灌注后大鼠中脑黑质部位星形胶质细胞、多巴胺能神经元、细胞凋亡的变化及EGb761的干预作用,为临床治疗提供理论依据。材料与方法1实验动物与分组：清洁级健康雄性SD大鼠54只,体重220±30g,随机分为三组：假手术组,模型组,EGb761干预组,每组18只,每组再分为三个不同时间点1天、3天、7天,每个时间点6只大鼠。2模型的制作：参照Longa的大鼠大脑中动脉内栓线阻断法(MCAO)适当改良后进行。建立大脑中动脉缺血再灌注模型,假手术组除不插线外,余步骤同其它两组。术后观察同侧Homer氏征及对侧肢体瘫痪体征来判断模型是否成功。3动物给药方法：将标准银杏叶提取物(EGb761)金纳多片研成粉末状,用蒸馏水溶解并混匀配成浓度为5mg/ml的溶液,术后24小时按照0.5m1/100g灌胃,假手术组和模型组给予等量生理盐水灌胃。各组灌胃均每日一次,直至处死。4标本的收集与处理：模型制作成功后大鼠分别于1d、3d、7d时,10%水合氯醛(2.5ml/kg)麻醉下,心脏灌注,断头取脑,固定后制作石蜡切片,供HE染色、免疫组化染色、TUNEL检测用。5观察指标：(1)HE染色观察脑组织病理变化；(2)免疫组化染色检测大鼠脑组织梗死后中脑黑质部位GFAP、TH免疫染色阳性细胞数的表达情况；(3)TUNEL检测细胞凋亡情况。6统计方法：实验数据用均数±标准差(x±s)表示,应用SPSS16.0统计软件进行统计分析。以α=0.05作为显著性检验水准。结果1 HE染色：假手术组中脑黑质细胞结构紧密,层次清晰,神经元偶见变性、坏死,大部分细胞形态正常未见明显的病理变化；模型组细胞排列稀疏,结构紊乱,神经元数目明显减少,可见大量变性、坏死的神经元,可见胞核皱缩、碎片出现,细胞周围有间隙,空泡变性；EGb761干预组神经细胞的结构破坏及神经元变性、坏死较模型组明显减轻。2GFAP免疫组化染色：各组取同侧黑质部位进行观察,计数GFAP免疫染色阳性细胞个数进行统计分析。假手术组GFAP阳性细胞数有少量表达,各组间差别无显著意义。1d、3d、7d时GFAP阳性细胞表达,模型组分别为12.17±2.04；19.00±1.78、25.33±2.12；干预组：10.00±1.41、14.33±2.73、17.16±1.47。模型组各时间点GFAP阳性细胞数均明显多于假手术组和干预组,7d时阳性细胞数较1d、3d多,差异均具有统计学意义(P<0.01)。3细胞凋亡的检测：TUNEL检测细胞凋亡阳性数目,假手术组各时间点未见阳性细胞。1d、3d、7d时阳性细胞数,模型组：12.23±4.97、39.40±6.94、26.18±6.53；干预组：7.31±1.92、20.26±4.61、12.23±3.70。模型组和干预组均有大量凋亡阳性细胞,且均3d时最多,干预组较模型组明显减少,差别有统计学意义(P<0.01)。4 TH免疫组化：TH为胞质和胞膜着色,阳性细胞显示深棕黄色或深褐色。1d、3d、7d时各组阳性细胞数分别为：假手术组23.39±1.14、24.87±1.98、23.79±2.23；模型组11.67±1.36、8.87±2.43、6.15±1.09；干预组18.68±1.29、14.38±0.71、10.17±1.82。与假手术组比较,缺血再灌注后各时间点,中脑黑质TH阳性细胞表达减少,差别有统计学意义(P<0.05),干预组明显多于模型组,差别显著(P<0.05)。结论1脑缺血再灌注后梗死灶远隔部位存在胶质细胞过度活化、DA能神经元减少及细胞凋亡。2 EGb761可通过抑制脑缺血再灌注后远隔损伤部位星形胶质细胞的过度活化,减少细胞凋亡。3 EGb761对急性脑缺血再灌注后远隔部位的多巴胺神经元、神经胶质细胞有保护作用。

全文目录

摘要  4-7
Abstract  7-12
前言  12-14
材料与方法  14-20
结果  20-24
讨论  24-35
结论  35-36
附图  36-39
参考文献  39-44
综述神经胶质细胞与脑缺血  44-58
  参考文献  54-58
缩略词索引  58-59
致谢  59

EGb761对脑缺血再灌注后大鼠中脑胶质细胞和多巴胺神经元的影响

内容摘要

全文目录

相似论文