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热加工、辐照及超高压微射流对花生过敏原Ara h 6结构与抗原性的影响

作　者: 罗春萍
导　师: 陈红兵
学　校: 南昌大学
专　业: 生物化工
关键词: 花生过敏 Ara h 6 热加工辐照超高压微射流结构抗原性
分类号: R392.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

花生是人类最优质的植物蛋白来源之一,也是八大类容易引起过敏的食物之一。近年来,由于花生过敏患者数量呈明显上升的趋势,探索降低花生过敏性的研究受到了人们的高度重视。Ara h 6是花生主要过敏原之一,可引发63%的花生过敏患者发生过敏反应。因此,本论文工作以Ara h 6为对象,研究加工对花生过敏原结构及抗原性的影响,旨在阐明Ara h 6经加工后的结构变化与其抗原性的关系。论文开展的研究工作包括花生过敏原Ara h 6的纯化与提取、兔抗Ara h 6多克隆抗体的制备、热加工和辐照及超高压微射流对花生过敏原Ara h 6结构与抗原性的影响。研究的主要方法、结果及结论如下。1.采用阴离子交换层析法从新鲜花生仁中分离纯化花生过敏原Ara h 6,并通过SDS-PAGE电泳、MALDI-TOF/MS质谱对分离所得目标蛋白进行鉴定。结果表明,该方法分离所得的Arah 6的纯度大于95%,得率为18.3%。该方法简单、易操作、重现性好,适用于实验室少量制备。2.以纯化的Ara h 6为抗原,免疫新西兰大白兔,获得抗Ara h 6的兔多克隆抗体,通过间接ELISA和免疫印迹方法鉴定其效价和特异性,结果表明,该抗体效价为1：100,000,特异性强,可满足抗原性评估的要求。3.对Ara h 6纯化蛋白和花生粗蛋白分别进行不同的热处理,通过SDS-PAGE电泳、圆二色谱、紫外光谱、荧光探针光谱检测Ara h 6热加工后的结构变化,并采用间接ELISA方法测定热加工后Ara h 6纯化蛋白和花生粗蛋白的抗原性变化。结果表明,Ara h 6经热处理后,其最大紫外吸光值增大,疏水性增强,各类型二级结构相互转变,且115℃热处理可使Ara h 6形成多聚体；抗原性分析结果则表明,随着加热程度的增强,Ara h 6纯化蛋白和粗蛋白的抗原性降低。由此推断,Ara h 6蛋白经热加工后的构象变化导致了它的抗原性降低,蛋白构象对于Ara h 6蛋白的抗原性起着关键的作用。4.对Ara h 6纯化蛋白和花生粗蛋白分别进行辐照和超高压微射流处理,通过SDS-PAGE电泳、圆二色谱、紫外光谱、荧光探针光谱检测Ara h 6加工后的结构变化,并采用间接ELISA方法测定加工后Ara h 6纯化蛋白和花生粗蛋白的抗原性变化。结果表明,Ara h 6经辐照或超高压微射流处理后,蛋白质分子展开,疏水基团暴露,二级结构改变,且辐照处理可使Ara h 6形成多聚体；间接ELISA检测结果表明,随着辐照剂量的升高或超高压微射流处理压力的增加,Ara h 6纯化蛋白和粗蛋白的抗原性降低。由此推断,辐照和超高压微射流处理破坏了Ara h 6蛋白的结构特征,导致该蛋白抗原性降低,该蛋白的结构稳定性对其抗原性具有至关重要的作用。

热加工、辐照及超高压微射流对花生过敏原Ara h 6结构与抗原性的影响

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