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MCAO气虚血瘀证大鼠子二代脑缺血耐受性及脂代谢情况的实验研究

作　者: 陈维
导　师: 刘福友
学　校: 成都中医药大学
专　业: 中西医结合临床
关键词: MCAO 气虚血瘀证 SD大鼠 子二代
分类号: R277.7
类　型: 博士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


目的：获取MCAO气虚血瘀证大鼠子二代,与正常同龄SD大鼠相比,研究其脑缺血耐受性有无差异,是否存在血脂紊乱及APOE基因表达的改变,探讨其缺血性脑卒中发病风险是否高于正常同龄SD大鼠。方法：第一部分：在获取的MCAO气虚血瘀证子二代大鼠中随机选取10只进行证候造模(模型组),与同样进行证候造模的10只正常同龄SD大鼠(对照组)及无干预因素参与的10只正常同龄SD大鼠(空白组)比较,观察其气虚证辨证评分、血瘀证辨证评分及相关行为学评分(旷场分析、攀网试验)第二部分：随机选取前MCAO气虚血瘀证子二代大鼠20只及正常同龄SD大鼠20只,分为正常对照组、子二代组、药物干预组、假手术组4组,采用全脑一局灶脑缺血耐受的造模方法,观察其神经功能缺损评分,处死大鼠后,灌注固定脑组织,HE染色观察其缺血脑组织病理改变；免疫组化检测其缺血脑组织BDNF、Bax、Bel-2、ERK的表达。第三部分：随机选取MCAO气虚血瘀证子二代大鼠10只(子二代组)及正常同龄SD大鼠10只(空白对照组),观察其血脂(TG、TC、HDL-C、LDL-C)及血浆APOE基因表达水平是否存在差异,并比较两组大鼠的血脂促动脉硬化指数及血脂综合指数。结果：第一部分：证候学评分：在证候造模因素干预前,模型组大鼠气虚证评分虽未达到8分,但明显高于对照组及空白组(P<0.05),而血瘀证的评分,在证候造模因素干预前三组大鼠无明显差异(P>0.05)；造模因素干预28天后,模型组10只大鼠中,有8只大鼠同时满足气虚证评分≥8分及血瘀证评分≥8分；而对照组10只大鼠中,仅有6只同时满足气虚证评分≥8分及血瘀证评分≥8分；且模型组气虚证评分与血瘀证评分均明显高于对照组。行为学评分：在证候造模因素干预前,模型组大鼠的中央格起始停留时间评分高于对照组和空白组,而模型组大鼠垂直活动次数评分低于对照组和空白组(P<0.05)；证候造模因素干预28天后,中央格起始停留时间评分,模型组明显高于对照组和空白组,且对照组也高于空白组,而大鼠垂直活动次数、跨格次数、攀网实验评分,模型组明显低于对照组和空白组,且对照组也低于空白组(P<0.05)。第二部分：神经功能缺损评分：子二代组大鼠的神经功能损缺评分高于正常对照组(P<0.05),而与假手术组相比无明显差异(P>0.05)；同时药物干预组的神经功能损缺评分明显低于子二代组及假手术组(P<0.01)。BDNF表达：正常对照组、药物干预组的BDNF蛋白表达均高于假手术组及子二代组(P<0.05)；而子二代组的BDNF蛋白表达与假手术组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。并且药物干预组的BDNF蛋白表达明显高于子二代组,差异有统计学意义(P<0.05)。Bax表达：正常对照组、药物干预组的Bax蛋白表达均低于假手术组及子二代组(P<0.05)：而子二代组的Bcl-2蛋白表达与假手术组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。并且药物干预组的Bax蛋白表达明显低子二代组(P<0.05),而与正常对照组相比无明显差异(P>0.05)。Bcl-2表达：正常对照组、药物干预组的Bcl-2蛋白表达均高于假手术组子及二代组(P<0.05)；而子二代组的Bcl-2蛋白表达与假手术组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。并且药物干预组的Bcl-2蛋白表达明显高于子二代组(P<0.05)。ERK表达：正常对照组、药物干预组的ERK蛋白表达均高于假手术组及子二代组(P<0.05)；而子二代组的ERK蛋白表达与假手术组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。并且药物干预组的ERK蛋白表达明显高于子二代组(P<0.05)。第三部分：血脂：子二代组大鼠的TC、LDL-C水平与空白对照组比较,无统计学差异(P>0.05)；而子二代组大鼠的TG水平明显高于空白对照组,(P<0.01),并且其HDL-C水平低于空白对照组(P<0.05)。子二代组大鼠的AIP及LCI均明显高于空白对照组(P<0.01)。血浆APOEmRNA表达：子二代组大鼠血浆中APOE基因表达的相对含量高于空白对照组(P<0.05)。结论：1. MCAO气虚血瘀证大鼠子二代与正常同龄SD大鼠相比,存在一定程度的气虚倾向,在证候造模因素的干预下,能更为容易的形成更加明显的气虚血瘀证候；2. MCAO气虚血瘀证大鼠子二代与正常同龄SD大鼠相比,对脑缺血的耐受及修复能力降低,在缺血因素的干预下更容易形成更严重的缺血性脑损害,其发生缺血性脑卒中的风险高于正常同龄SD大鼠。3. MCAO气虚血瘀证子二代大鼠的脑缺血耐受性降低可能与其ERK信号转导通路及其下游靶基因和蛋白(细胞凋亡相关基因Bcl-2、Bax, BDNF)的表达异常有关。4.使用益气活血的脑心通胶囊可以改善MCAO气虚血瘀证子二代大鼠的脑缺血耐受性,促进其对缺血性脑损伤的修复能力。5. MCAO气虚血瘀证大鼠子二代与正常同龄SD大鼠相比,存在明确的血脂代谢紊乱。6. MCAO气虚血瘀证大鼠子二代与正常同龄SD大鼠相比,血浆APOEmRNA表达增高。

全文目录


中文摘要  3-6
Abstract  6-12
英文缩略词表  12-13
前言  13-16
第一部分 MCAO气虚血瘀证大鼠子二代的获取及评价  16-33
  1. 材料与方法  16-22
    1.1 实验动物  16
    1.2 实验试剂及药物  16
    1.3 实验器材  16-17
    1.4 研究方法  17-22
      1.4.1 MCAO气虚血瘀证大鼠亲代模型的制备  17-20
        1.4.1.1 MCAO气虚血瘀证大鼠造模方法  17-18
        1.4.1.2 气虚血瘀证模型评定  18-20
        1.4.1.3 MCAO模型评定  20
      1.4.2 MCAO气虚血瘀证大鼠子代的获取  20-21
      1.4.3 大鼠子二代实验部分  21-22
        1.4.3.1 MCAO气虚血瘀证大鼠子二代的获取  21
        1.4.3.2 研究分组及研究方法  21
        1.4.3.3 保证各组实验动物数相等的补救措施  21
        1.4.3.4 相关行为学评价  21-22
      1.4.4 统计分析  22
  2 实验结果  22-29
    2.1 MCAO气虚血瘀证子代大鼠的生殖情况  22-23
    2.2 证候造模干预前各组大鼠证候学及行为学评分  23-24
    2.3 证候造模干预14天后各组大鼠证候学及行为学评分  24
    2.4 证候造模干预28天后各组大鼠证候学及行为学评分  24-25
    2.5 三组大鼠各项评分的变化趋势  25-28
    2.6 模型组与对照组不同时点证候符合数比较  28-29
  3. 讨论  29-32
    3.1 先天禀赋与缺血性脑卒中发生的关系  29-30
    3.2 MCAO气虚血瘀证子二代大鼠模型的评价  30-32
      3.2.1 MCAO气虚血瘀证子二代大鼠的证候学评价  30-31
      3.2.2 MCAO气虚血瘀证子二代大鼠的行为学评价  31-32
    3.3 MCAO气虚血瘀证大鼠子二代证候趋势  32
  小结  32-33
第二部分 MCAO气虚血瘀证大鼠子二代脑缺血耐受性的实验研究  33-54
  1. 材料与方法  33-40
    1.1 实验动物  33
    1.2 实验药物  33
    1.3 主要试剂及实验仪器  33-34
    1.4 主要试剂配置  34-35
    1.5 实验方法  35-40
      1.5.1 实验分组  35
      1.5.2 预缺血与再缺血模型的制备  35-36
      1.5.3 保证各组实验动物数相等的补救措施  36-37
      1.5.4 大鼠神经功能缺损评分标准  37
      1.5.5 大鼠脑缺血耐受性的评价  37
      1.5.6 灌注固定及取脑包埋  37-38
      1.5.7 HE染色  38
      1.5.8 免疫组织化学染色  38-40
      1.5.9 免疫组化结果的图象分析  40
    1.6 统计学处理  40
  2. 结果  40-47
    2.1 本实验中SD大鼠死亡原因  40-41
    2.2 各组大鼠神经功能缺损评分  41-42
    2.3 HE染色结果  42-43
    2.4 免疫组织化学染色结果  43-47
      2.4.1 BDNF免疫组化染色结果  43-44
      2.4.2 Bax免疫组化染色结果  44-45
      2.4.3 Bcl-2免疫组化染色结果  45-46
      2.4.4 ERK免疫组化染色结果  46-47
  3. 讨论  47-53
    3.1 脑缺血耐受与缺血预处理  47-48
    3.2 子二代组大鼠BDNF的表达及脑心通的干预作用  48-49
    3.3 子二代组大鼠Bcl-2、Bax的表达及脑心通的干预作用  49-50
    3.4 子二代组大鼠ERK的表达及脑心通的干预作用  50-51
    3.5 MCAO气虚血瘀证子二代大鼠的脑缺血耐受性  51-52
    3.6 MCAO气虚血瘀证子二代大鼠脑缺血耐受性的可干预性  52-53
      3.6.1 选取脑心通胶囊作为干预药物的依据  52-53
      3.6.2 脑心通对子二代组大鼠脑缺血耐受性的影响体现了中医"治未病"思想  53
  小结  53-54
第三部分 MCAO气虚血瘀证大鼠子二代的血脂及血浆APOEMRNA表达的实验研究  54-76
  1. 材料与方法  54-59
    1.1 实验动物  54
    1.2 实验试剂及药物  54
    1.3 主要实验仪器  54-55
    1.4 实验方法  55-59
      1.4.1 研究分组及研究方法  55
      1.4.2 保证实验动物达到最低统计学要求标准的补救措施  55
      1.4.3 大鼠血脂测定  55-56
      1.4.4 大鼠血脂异常的评定标准  56
      1.4.5 Real一timePCR测定大鼠血浆APOEmRNA表达  56-59
    1.5 统计分析  59
  2. 实验结果  59-65
    2.1 两组大鼠的血脂水平  59-61
    2.2 两组大鼠的血脂促动脉硬化指数A(I)P及血脂综合指数(比)l  61
    2.3 子二代大鼠血脂异常情况  61-62
    2.4 斗两组大鼠血浆RAN的提取物的鉴定  62
    2.5 实时荧光定量pCR的扩增结果  62-65
  3. 讨论  65-75
    3.1 血脂异常与缺血性脑卒中  65-68
    3.2 PAEO基因与缺血性脑卒中  68-69
    3.3 实时荧光定量RT一PCR(Real一timepCR)  69-74
    3.4 气虚血痕证造模及MCOA造模对Ds大鼠子二代脂代谢的影响  74
    3.5 CMOA气虚血癖证大鼠子二代血浆APOE血诩A的表达  74-75
  小结  75-76
全文总结  76-78
全文结论  78-79
创新点及应用价值  79-80
问题与展望  80-81
致谢  81-82
参考文献  82-91
文献综述一 缺血性脑卒中遗传易感性的研究进展  91-101
  参考文献  98-101
文献综述二 表观遗传学与缺血性脑卒中危险因素  101-111
  参考文献  107-111
附图  111-118
附件  118-119

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中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中医其他学科 > 中医神经病学与精神病学
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