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PPA对人呼吸道上皮细胞增殖、TLR4、Act1、A20表达的影响

作　者: 杨慧慧
导　师: 王莉莉
学　校: 中南大学
专　业: 医学微生物学
关键词: PPA TLR4 Act1 A20 细胞周期
分类号: R965
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的：Toll样受体(TLRs)是细胞表面识别病原相关分子模式的个模式识别受体家族,在气道的天然免疫及获得性免疫中发挥重要的作用。TLRs表达缺陷或反应低下常常导致气道的慢性感染。Actl是IL-25信号途径的重要信号分子,促进Th2炎症反应；A20由即刻早期应答基因编码,充当NF-κB信号途径的潜在抑制剂。本研究拟应用导入含有TLR4天然配体的PPA,通过其干预过敏源诱导或病毒感染的支气管上皮细胞,观察其对气道上皮TLR4、Act1、A20及增殖功能的影响,以探求PPA在气道疾病治疗中的作用。方法：HBECs经过敏源OVA诱导或RSV感染,再进行PPA干预,用流式细胞仪检测HBECs勺细胞周期,用荧光定量PCR检测TLR4、Actl和A20 mRNA表达差异。结果：1、细胞周期：PPA干预引起OVA处理组或RSV感染组的HBECs S期细胞增加(P<0.05)。2、TLR4:PPA干预引起OVA处理组的HBECs TLR4 mRNA表达显著性增加(P<0.01)；引起RSV处理组的HBECs TLR4 mRNA表达增加(P<0.05)。3、Actl：PPA干预引起OVA处理组的HBECs Act1 mRNA表达显著性减少(P<0.01)；引起RSV处理组的HBECs Act1 mRNA表达显著性增加(P<0.01)。4、PPA干预引起OVA处理组或RSV感染组的HBECs A20 mRNA表达显著性增加(P<0.01)。结论：1、PPA能显著促进气道上皮细胞的增殖,并且能干预OVA处理的或RSV感染的抑制气道上皮细胞增殖的作用。2、PPA干预可上调HBECs TLR4的表达。3、PPA干预能抑制过敏源诱导的HBECs Act1的表达。4、PPA干预可上调HBECs A20的表达,抑制NF-κB途径诱导的炎症反应。

全文目录

摘要  4-5
ABSTRACT  5-9
英汉缩略词对照表  9-11
前言  11-13
第一章材料与方法  13-29
  1.1 实验材料  13-15
    1.1.1. 细胞株  13
    1.1.2. 主要试剂及其来源  13
    1.1.3. 主要仪器设备  13-15
  1.2 实验技术路线  15
  1.3 实验方法  15-29
    1.3.1. 人支气管上皮细胞株的细胞培养  15
    1.3.2. RSV病毒悬液制备及毒力检测  15-20
    1.3.3. OVA刺激HBEC  20
    1.3.4. 半定量RT-PCR检测PPA刺激HBECs产生TLR4  20-23
    1.3.5. 细胞周期的检测  23-25
    1.3.6. 荧光定量PCR检测TLR4、Act1及A-20的表达  25-29
第二章结果  29-41
  2.1. RSV TCID_(50)滴定  29
  2.2. RSV噬斑形成单位测定结果  29-30
  2.3. RT-PCR鉴定RSV  30-31
    2.3.1. HBECs总RNA的提取结果  30
    2.3.2. RT-PCR检测RSV在HBECs中的复制  30-31
  2.4. 半定量RT-PCR检测PPA刺激HBECs产生的TLR  31-33
    2.4.1. HBECs总RNA的提取结果  31
    2.4.2. 半定量RT-PCR检测PPA刺激HBECs产生的TLR4的结果  31-33
  2.5. 细胞周期的检测  33-36
    2.5.1 细胞周期检测结果  33-36
  2.6. 荧光定量PCR检测TLR4、Actl及A-20的表达  36-41
第三章讨论  41-45
  3.1 OVA、RSV、PPA对HBECs增殖的影响  41
  3.2 PPA对HBECsTLR4表达的影响  41-42
  3.3 PPA对HBECsAct1表达的影响  42-43
  3.4 PPA对HBECsA20表达的影响  43-45
第四章结论  45-46
参考文献  46-51
综述  51-62
  参考文献  57-62
致谢  62

PPA对人呼吸道上皮细胞增殖、TLR4、Act1、A20表达的影响

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