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影响羟基磷灰石纳米颗粒DNA转染率因素的研究

作　者: 徐慧芳
导　师: 孙虹
学　校: 中南大学
专　业: 耳鼻咽喉头颈外科
关键词: 羟基磷灰石纳米颗粒聚乙烯亚胺基因载体转染因素
分类号: R318.08
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 16次
引　用: 1次
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内容摘要

目的：研究羟基磷灰石纳米颗粒介导DNA转染的影响因素。方法：观察聚乙烯亚胺(Polyethylenimine, PEI)等表面活性剂处理的羟基磷灰石纳米颗粒(nanoparticle hydroxyapatite,简称nHA)(以下简称PEI-nHA)混悬液在室温下的悬浮稳定性；用PEI-nHA与携带CX26基因的质粒DNA形成的复合物转染Hela细胞。在转染过程中,通过分别改变四个重要实验条件(PEI-nHA浓度、DNA量、细胞接种数量、共转染时间)的参数,观察基因转染效率的变化；不同的基因载体(未经修饰的nHA、PEI-nHA、PEI)与携带CX26基因的质粒DNA形成的复合物转染Hela细胞,观察转染效率。结果：PEI-nHA配置成不同浓度的混悬液在室温下静置24小时后观察,具有良好的悬浮稳定性。静置2个月后观察,浓度为≥1000μg/ml的PEI-nHA悬浮稳定性良好,浓度≤500μg/ml的可见分层。PEI-nHA转染质粒DNA研究结果：1) PEI-nHA最佳浓度为250μg/ml; 2)DNA最佳量为2μg; 3) Hela细胞接种按4×105计数较适宜；4)共转染最佳时间为6小时。未经修饰的nHA转染率在10%左右；PEI-nHA的转染率在28%左右；PEI的转染率在55%左右。结论：1.经PEI修饰后的nHA载体具有良好的分散性和悬浮稳定性；高浓度的PEI-nHA悬浮稳定性较低浓度的PEI-nHA悬浮稳定性好,提示液相PEI-nHA应以高浓度保存；2.PEI修饰nHA提高了nHA体外细胞转染率；3.PEI的转染率高于PEI-nHA.4.PEI-nHA的体外转染率为28%。

全文目录

摘要  4-6
ABSTRACT  6-9
前言  9-11
第一章实验材料与方法  11-20
  1.1 实验的试剂、材料、仪器  11-13
  1.2 保存质粒的转化、抽提、测序、纯化  13-14
  1.3 PEI-nHA的制备及性能的评估  14-16
  1.4 细胞培养  16
  1.5 细胞转染过程中各条件参数的优化  16-18
  1.6 nHA、PEI-nHA和PEI转染Hela细胞  18-19
  1.7 统计方法  19-20
第二章实验结果  20-29
  2.1 质粒DNA的双酶切鉴定、测序  20
  2.2 PEI-nHA颗粒混悬液的悬浮稳定性及DNA结合实验  20-22
  2.3 细胞转染过程中各条件参数的优化  22-27
  2.4 nHA、PEI-nHA和PEI转染Hela细胞  27-29
第三章讨论  29-33
  3.1 PEI_nHA颗粒毒性及悬浮稳定性  29-30
  3.2 纳米基因载体的靶向性  30-31
  3.3 转染过程中的各种影响因素  31-32
  3.4 PEI-nHA基因载体与PEI基因载体的比较  32-33
第四章结论  33-34
参考文献  34-39
综述  39-48
  参考文献  45-48
致谢  48-49
攻读学位期间主要的研究成果  49

影响羟基磷灰石纳米颗粒DNA转染率因素的研究

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