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苹果含有丰富的营养物质,风味浓郁,在人们的日常生活中占据着越来越重要的地位,深受人们的喜爱。但是,苹果种植会受到地域和时间的限制,并且常温货架期较短。其中,霉菌是苹果腐烂的重要原因之一,如扩展青霉。化学杀菌剂可以有效降低霉菌的发病率,但由于公众对农药残留和病菌耐药性的担忧,很多国家开始限制使用甚至禁止使用化学杀菌剂,因此寻求安全简便的苹果保鲜方法成为人们关注的热点。本实验将涂膜保鲜技术与生物保鲜技术相结合,采用天然无毒物质,制备成含有海洋拮抗酵母的海藻酸钠-结冷胶共混膜（简称活性可食膜）,用于苹果保鲜,以期为苹果保鲜新技术的开发提供依据。主要研究结果如下:第一,有目的性和针对性地筛选能在较大温度范围及贫营养环境下抑制扩展青霉生长的海洋酵母,因而从一定深度的海水水样中筛选适合菌株以尽快适应苹果表面微环境,同时选择在厌氧条件下几乎不产乙醇的菌株。之后通过BIOLOG系统和26S分子方法将其鉴定为Candida orthopsilosis。最后,对该株酵母的基本性质及生长条件进行相关实验,发现该酵母菌菌体呈圆球形,可形成假丝状细胞串,生长繁殖能力较强,生长至16 h即可达到108 CFU/mL生物量,并且可以在贫瘠的培养基上生长,最佳培养基成分为:3 %葡萄糖、3 %麦芽糖,1.5 %酵母膏、0.15 % KH2PO4、0.03 %CaCl2、0.2 %MgSO4、0.35 %NaCl。同时在苹果体内进行抑制扩展青霉生长的相关实验,发现主要起抑菌作用的为酵母细胞菌体,而酵母发酵液基本不起抑菌作用。另外,抑菌能力与酵母浓度及接种间隔都相关,酵母先于霉菌接种,酵母浓度越大,则抑菌能力越强。第二,对海洋拮抗酵母的抑菌机理进行探讨,为体现其抑制扩展青霉生长的能力,将其与罗伦隐球酵母进行对比,其中罗伦隐球酵母是公认的拮抗霉菌能力较强的酵母。结果发现,海洋拮抗酵母可以长时间地抑制霉菌的生长,甚至在平板实验第7天时仍有约8 mm的抑菌圈,而罗伦隐球酵母在3天后即不再起抑制霉菌生长的作用,第7天时整个平板都布满了霉菌孢子。同时,海洋拮抗酵母在抑制孢子萌发、芽管伸长及与霉菌进行空间与营养竞争等方面的能力也超过罗伦隐球酵母。同时,从苹果体内打洞实验来看,海洋拮抗酵母和罗伦隐球酵母都能显著抑制扩展青霉的生长,降低腐败率及腐败程度,可以分别将苹果腐败程度从对照组的31.3 mm降至12.9 mm和14.4 mm,可以看到海洋拮抗酵母的抑菌性能更强。另外,两株酵母对霉菌（扩展青霉、黑曲霉、黄曲霉等）都有一定的抑制作用,但对细菌（大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、产气荚膜梭菌、枯草芽孢杆菌、荧光假单胞菌等）抑制作用不大。可见,海洋拮抗酵母和罗伦隐球酵母的抑菌谱相似,但从最低抑菌浓度（MIC）实验来看,海洋拮抗酵母的MIC为106 CFU/mL,而罗伦隐球酵母的MIC比其高得多,为108 CFU/mL,可见海洋拮抗酵母的抑菌能力更强。另一方面,与罗伦隐球酵母相比,在低温和贫营养等不利条件下海洋拮抗酵母可以很快适应并迅速繁殖至较多的生物量。第三,对多种可食膜（结冷胶、明胶、卡拉胶、黄原胶、角豆胶、羧甲基纤维素、魔芋胶、高甲氧基果胶等）与海藻酸钠的共混效果进行了研究,通过正交优化实验最终选用海藻酸钠-结冷胶（1: 9）共混膜作为本实验可食膜。同时,为增强可食膜稳定性,使其不会因冷凝水而溶解从而影响苹果感官效果,采用CaCl2交联方式使可食共混膜更好地附着于苹果表面。最后,对可食共混膜进行了红外、DSC及电镜等微观检测,发现可食共混膜相容性较好,呈多层网格状结构。同时发现该可食共混膜厚度较小,水蒸气透过率和透氧率都处于较低水平,机械性能良好,因此可以很好地应用于苹果保鲜。第四,将海洋拮抗酵母加入到海藻酸钠-结冷胶共混膜中,制备成活性可食膜涂于苹果表面,再经CaCl2交联过程将活性可食膜稳固地附着于苹果表面,进行苹果保鲜实验。结果发现,活性可食膜同时发挥了可食膜和拮抗菌的作用,与对照组、酵母组及膜组相比,膜+酵母组可以明显降低失重率和腐败率,并使果实硬度及耐压强度保持在较高水平,同时含有较高的可溶性固形物,物理性能较好。另外,活性可食膜可以明显减缓Vc含量、多糖含量及可滴定酸含量的下降速率,并抑制丙二醛（MDA）含量的上升。海洋拮抗酵母还能诱导苹果机体产生相关酶系保护机体,如SOD酶、CAT酶等。因此,活性可食膜可以有效地控制苹果腐败的发生和微生物污染,并较好地保持苹果品质。
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