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HLA-A~*0201基因转染云南宣威肺腺癌细胞XWLC-05抗肿瘤效应的研究

作　者: 郑锦飞
导　师: 郝萍；周克敏；王秦秦；李继梅；马丽菊
学　校: 昆明医学院
专　业: 肿瘤学
关键词: 人类白细胞抗原 HLA-A~*0201 云南宣威肺腺癌细胞XWLC-05 转染 P53肽段
分类号: R734.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2008年
下　载: 14次
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内容摘要

【目的】:以云南肺癌易感基因HLA-A*0201为基础,用HLA-A2限制的P53_264-272肽段特异的多聚体型TCR（264scTCR/multimer）识别转染HLA-A*0201基因的靶细胞-宣威肺腺癌细胞株（XWLC-05）表面P53_264-272/HLA-A2复合物,进一步用XWLC-05中HLA特异性分子限制的抗原肽,诱导T淋巴细胞高度特异识别和杀伤靶细胞。探讨HLA-A2分子限制的,肿瘤细胞毒性T淋巴细胞（cytotoxic T lymphocytes,CTLs或Tc）的特异性杀伤能力,为我国自主研发全球首获临床使用的P53基因个体化治疗和进一步完善肺癌早期预防奠定了必备基础。【方法】:利用序列特异性引物扩增法（PCR-SSP）测定出HLA-A*0201阴性的宣威肺腺癌细胞株XWLC-05和HLA-A*0201阳性,HLA-A*0201阴性的健康人外周血。应用构建好的HLA-A*0201基因真核质粒表达载体转染HLA-A*0201基因于宣威肺腺癌细胞株XWLC-05中进行表达。经测定表达阳性后与野生型P53_264-272肽段共孵育,TCR受体多聚体（264TCR/multimer）染色后,流式细胞术（FCM）测定表达识别。同时用乳腺癌细胞株MDA-MB231为阳性对照细胞,未转染的宣威肺腺癌细胞株XWLC-05为阴性对照细胞。然后用免疫磁珠淋巴细胞分选方法分离出CD8⁺T淋巴细胞和CD4⁺T淋巴细胞,用MTT法肿瘤特异性细胞毒试验来观察CD8⁺T和CD4⁺T淋巴细胞对HLA-A*0201基因转染后肿瘤细胞的抗肿瘤效应。【结果】:筛选出HLA-A*0201表达阴性的肺癌细胞株XWLC-05,HLA-A*0201基因稳定转染该细胞株,筛选获稳定表达的阳性克隆,培养该阳性克隆XWLC-05细胞与外源野生型P53_264-272肽段和人β2微球蛋白共同孵育。经TCR的多聚体（264scTCR/multimer）染色后,流式细胞术（FCM）测定表达识别为阳性结果。经过激活免疫分选的HLA-A*0201表达阳性和HLA-A*0201阴性的CD8⁺T和CD4⁺T淋巴细胞进行淋巴细胞体外杀伤试验,发现HLA-A*0201表达阳性的CD8⁺T和CD4⁺T淋巴细胞共同作用对转染HLA-A*0201基因的肿瘤细胞有更强的杀伤活性,差异有显著性。【结论】:HLA-A*0201基因缺失、突变或低表达,在导致云南宣威肺腺癌细胞XWLC-05免疫逃逸方面起重要作用,体外转染HLA-A*020l基因至HLA-A*0201表达缺失的云南宣威肺腺癌细胞XWLC-05可诱导HLA-A*02限制性、肿瘤特异性T淋巴细胞对其的杀伤,而且CD8⁺T淋巴细胞和CD4⁺T淋巴细胞共同作用杀伤活性更高。HLA-A*0201基因转入云南宣威肺腺癌细胞株XWLC-05中可高效表达并递呈P53肽段,能有效地活化T细胞介导的特异性抗肿瘤效应。

全文目录

中文摘要  6-8
英文摘要  8-10
前言  10-12
材料与方法  12-21
结果  21-28
讨论  28-37
结论  37-38
参考文献  38-42
综述  42-50
致谢  50

HLA-A~*0201基因转染云南宣威肺腺癌细胞XWLC-05抗肿瘤效应的研究

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