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用于发酵床养殖的细菌分离鉴定及应用效果研究

作　者: 朱玉
导　师: 陈强
学　校: 四川农业大学
专　业: 微生物学
关键词: 发酵床益生菌 BOX-AIR 16S rDNA PCR-RFLP PCR-DGGEGGE
分类号: Q93
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

随着养殖业的发展,畜禽粪尿污染问题日益严重,发酵床垫料养殖技术的应运而生。筛选具有除臭功能的细菌,将其应用于畜禽的发酵床养殖中,从而达到健康养殖、提高动物产品质量和产量的目的。本研究从土壤、堆肥样品中分离纯化获得105株细菌,筛选获得7株菌不产生氨气和硫化氢的菌株。对其生长pH值、温度、惟一碳、氮源利用,蛋白酶、淀粉酶活性,对动物的毒性试验等特性进行了分析,进而探讨了菌株的遗传特性。在此基础上,进行了发酵床垫料处理,接种供试菌株后,进行了15d发酵处理。分别测定了垫料发酵过程中的温度、pH值,垫料中铵态氮和硝态氮的含量；细菌、放线菌、真菌数量的变化；最后,利用DGGE技术检测了不同发酵时间垫料中微生物群落动态。结果如下：1.筛选获得7个菌株,菌属于革兰氏阳性芽孢杆菌,有耐高温、不耐低温的特点,在4℃和10℃不生长,全部菌株能够在45℃生长,其中4个菌株可在60℃生长。供试菌株在初始pH8-pH10培养基生长,不耐酸性,在初始pH4环境中不生长。2.供试菌株理化特性分析表明,供试菌株均能水解淀粉,能够以甘露醇和蔗糖为惟一碳源；能够以大多数供试氨基酸为唯一氮源,能够利用铵态氮和硝态氮。3. BOXAIR-PCR分析表明,菌株间遗传差异明显；在16S rDNA PCR-RFLP分析结果中,供试菌株分成了5个遗传群；代表菌株的16S rDNA基因序列比对结果显示,菌株B1是枯草芽孢杆菌(Bacillus stubtlis),菌株B5是栗褐芽孢杆菌(Bacillus badius),菌株B7是地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)。4.毒性试验中,饲喂菌株B5的小白鼠生长正常,无死亡；通过解剖观察,肉眼未见任何器质性病变,表明供试菌株对小白鼠无致病性。5.接种菌株B5的垫料发酵实验中,24h内垫料温度迅速升高至45℃左右,最高达70℃；发酵结束时,发酵床料温保持在50℃。发酵过程中,垫料中铵态氮和硝态氮含量迅速下降,由发酵初期的108.6mg/kg和138.72 mg/kg降至第8d的44.6mg/kg和52.32 mg/kg；随后,其含量略有上升。6.对垫料细菌的PCR-DGGE分析表明,发酵过程中,垫料中细菌种群多样性变化不大,群落稳定。

用于发酵床养殖的细菌分离鉴定及应用效果研究

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