学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示
无抗性标记转基因蓝藻的研究
作 者: 文磊
导 师: 章军
学 校: 厦门大学
专 业: 水生生物学
关键词: 蓝藻 EGFP FACS 安全标记
分类号: Q943.2
类 型: 硕士论文
年 份: 2007年
下 载: 183次
引 用: 1次
阅 读: 论文下载
内容摘要
蓝藻是一类具有广泛适应性的光能自养型的原核生物,其所含营养丰富,是人类未来理想的食品;同时,蓝藻作为基因工程受体具有许多优点;但转基因产品中的标记基因的存在是多余的,甚至是有害的,因此要培育具有安全标记基因或者去除选择标记基因的转基因产物;而增强型绿色荧光蛋白(EGFP)被证明是一种安全标记基因,因此本研究以安全标记基因EGFP为标记基因,去除抗生素标记基因,并与流式细胞技术(FACS)相结合,开发无抗性标记的转基因蓝藻。本次研究的第一部分,设计引物用PCR技术扩增得到钝顶螺旋藻(Spirulina platensis)cpcB基因的上游启动片段PcpcB,将此片段插入载体pEGFP中的5’MCS中,成功构建pCEGFP质粒,经过多步亚克隆成功地1.2kb大小的PcpcB和EGFP片段,插入含有蓝藻内源小质粒pPbS的穿梭质粒pPKE2中,并去除了质粒上的抗性片段,利用多色分析和高速分选流式细胞仪(FACS Vantage SE)分选得到无抗性荧光菌,成功获得无抗性穿梭质粒pCGP,利用自然转化法将该质粒转化集胞藻Synechocystis sp.PCC6803,FACS Vantage SE分选转化成功的EGFP标记的集胞藻6803,通过荧光显微镜观察,成功获得EGFP标记的无抗性标记集胞藻Synechocystis sp.PCC6803。由于穿梭质粒在没有抗性压力下很容易丢失,因此在第二部分采用基因整合系统,选用更有经济价值且已规模化养殖的螺旋藻作为转化受体,进行无抗性转基因螺旋藻的研究。本研究的第二部分,将1.2kb大小的PcpcB和EGFP片段插入钝顶螺旋藻同源重组质粒pKRET4的EcoR I位点,成功构建EGFP标记的同源重组质粒pCGKT,将4.2kb大小的无抗性同源重组片段切下回收,该片段含有钝顶螺旋藻的同源片段R(recA基因)、PcpcB启动子、EGFP基因以及人源胸腺素Tα1表达盒,利用超声转化法尝试将该片段转入钝顶螺旋藻中,荧光显微镜观察,由于各种因素的影响,未能在显微镜下观测到转化成功的钝顶螺旋藻。本研究首次将EGFP基因和FACS技术相结合,构建无抗性穿梭质粒载体和同源重组质粒,分别以集胞藻6803和钝顶螺旋藻为转基因受体细胞,并首次在无抗生素选择压力下将EGFP基因转入集胞藻6803中,筛选以EGFP为标记的无抗性标记的转基因藻株,对无抗性转基因蓝藻的转化及筛选方法进行了初步探索,为进一步开发无抗性转基因蓝藻打下了一定的基础。
|
全文目录
中文摘要 6-8 英文摘要 8-10 1 前言 10-22 1.1 转基因作物的研究现状 10-11 1.2 绿色荧光蛋白在生物学上的应用 11-13 1.3 FACS Vantage SE 系统 13-15 1.4 蓝藻的生物学性质 15-16 1.5 蓝藻的基因工程研究 16-18 1.6 蓝藻转基因载体系统及转化方法 18-22 1.7 本研究的目的和意义 22 2 材料与方法 22-30 2.1 材料 22-26 2.2 方法 26-30 3 结果和分析 30-45 3.1 无抗性穿梭质粒的构建 30-42 3.2 无抗性同源重组片段转化钝顶螺旋藻 42-45 4 讨论 45-46 4.1 无抗性穿梭质粒的构建 45-46 4.2 无抗性同源重组片段转化钝顶螺旋藻 46 5 小结 46-47 6 展望 47-48 参考文献 48-57 致谢 57
|
相似论文
- 丁香假单胞菌番茄致病变种和烟草致病变种egfp标记突变体的构建,S436.412
- 山仔水库沉积物蓝藻复苏环境影响因子研究,X524
- 太湖水华蓝藻脱水及好氧堆肥技术研究,S141.4
- 日本血吸虫DNA疫苗在小鼠体内的代谢及时空表规律研究,S855.91
- 水稻叶绿体表达载体的构建及遗传转化,S511
- 铜锈环棱螺对富营养化水体的综合生态效应,X524
- 基于底物类型的沉积型微生物燃料电池产电特性研究,TM919
- 陆地藻类在不同土壤基质中的生长以及土壤结皮的研究,S154
- 小鼠囊胚与黑色素瘤细胞体外共培养模型优化,Q813
- 基于安全标记的区域边界访问控制技术研究,TP393.08
- 褐菖鲉鳃丝和肝EROD与胆汁FACs生物标志物监测技术研究与应用,X174
- 蓝藻的气浮分离及其综合利用的研究,X70
- 纳米多孔吸附材料的制备、表征及蓝藻治理应用,X52
- 太湖蓝藻中天然色素提取技术的研究,TS264.4
- 转牛生长激素基因鸡的研究,S831
- 土壤、沉积物以及蓝藻中有机质标准物质的提取与表征,X502
- 巢湖湖滨带生态修复区水质和沉积物理化性质研究,X524
- 巢湖蓝藻衰亡过程中颜色、形态变化分析及资源化研究,X524
- 脱氮微生物的筛选及其脱氮性能研究,X52
- 多级安全数据库测试技术研究与测试工具设计,TP311.13
- 雨水与河道水对太湖蓝藻生长的影响,X173
中图分类: > 生物科学 > 植物学 > 植物细胞遗传学 > 植物基因工程
© 2012 www.xueweilunwen.com
|