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柔嫩艾美耳球虫杂交F2株致弱方法及免疫原性的研究

作　者: 刘春杰
导　师: 刘清河；赵权
学　校: 吉林农业大学
专　业: 临床兽医学
关键词: 柔嫩艾美耳球虫致弱超声波化学致弱剂 ELISA
分类号: S852.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
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内容摘要

鸡球虫病(Coccidiosis)是一种分布广、危害性大的肠道寄生原虫病，它主要侵害鸡的肠上皮细胞。该病以出血性肠炎、血痢、雏鸡高发病率和死亡率为特征，成为危害养鸡业的重要疾病之一。目前，控制球虫病仍以药物防治为主，但由于耐药虫株的普遍产生以及化学药物的残留等问题使得抗球虫药物的研制开发受到极大的限制。免疫预防是控制球虫病的理想方法，利用鸡弱毒球虫疫苗防治鸡球虫病不仅能彻底解决鸡球虫的耐药性问题，而且能够生产出绿色食品，保证肉、蛋质量。本研究探索致弱柔嫩艾美耳球虫杂交株卵囊的物理和化学方法，并对致弱卵囊免疫保护性和抗体消长规律进行研究。采用常规法扩增杂交株卵囊，并用物理方法和化学方法将其致弱。首先，将孢子化卵囊，在一定功率、不同超声时间的超声波作用下致弱，置于4℃冰箱备用。然后，配制化学致弱剂，将孢子化卵囊和化学致弱剂搅拌混合均匀，置于4℃冰箱致弱40d。将致弱卵囊口服接种肉鸡，进行肉鸡免疫性能试验。用卵囊计数、粪便记分、平均增重和免疫存活率等指标进行统计分析。建立检测鸡血清抗体OD值的间接酶联免疫吸附试验(ELISA)，按照间接ELISA实验方法的程序确定抗原最佳包被浓度、酶结合物工作浓度、被检血清最佳稀释度。采用上述条件探讨物理和化学方法致弱杂交卵囊免疫鸡后血清抗体OD值的动态变化规律。实验表明，超声波致弱柔嫩艾美耳球虫杂交F2株卵囊10min可有效地使球虫卵囊的毒力减弱，免疫剂量为每只鸡4×10~3个卵囊，分别于7日龄和14日龄口服接种致弱杂交球虫卵囊疫苗免疫，攻虫后7d肉鸡平均增重达155g，与对照组每只鸡平均增重25g相比差异极显著(p＜0.01)，攻虫存活率达100％。使用廉价、易得的化学试剂制备化学致弱剂，确定免疫剂量为每只鸡8×10~3个感染性卵囊，分别于7日龄和14曰龄口服致弱球虫卵囊疫苗免疫，攻虫后7d肉鸡平均增重达165g，与对照组每只鸡平均增重25g相比差异极显著(p＜0.01)，攻虫存活率也达100％。选用的化学致弱剂致弱F2株卵囊及在一定功率下超声处理杂交F2株卵囊10min，可使F2株卵囊致弱并保持良好的免疫原性，可作为疫苗使用。建立的间接ELISA法可应用于鸡球虫疫苗免疫的抗体检测。本文揭示了超声波致弱球虫卵囊和化学试剂致弱球虫卵囊免疫抗体消长规律，为进一步的球虫疫苗免疫研究奠定了理论和实践基础。

柔嫩艾美耳球虫杂交F2株致弱方法及免疫原性的研究

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