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丹皮多糖的一级结构研究与显微结构的观察

作　者: 廖洪梅
导　师: 戴玲
学　校: 安徽大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 丹皮多糖一级结构研究显微结构观察乙酰化正交试验
分类号: R284
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
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内容摘要

从丹皮中分离水溶性多糖，所得粗多糖经反复冻融、高速离心、DEAE-52离子交换和分子筛分离等方法，得级分PSM-2bA与PSM-2bB，经高压液相色谱方法证明为均一组分，经GC-MS分析，PSM-2bA的单糖组成为Rha、Ara、Xyl、Man、Glc、Gal，摩尔比依次为3.55：7.06：2.11：1.00：5.60：12.91；PSM-2bB的单糖组成为Rha、Ara、Xyl、Man、Glc、Gal，摩尔比依次为3.43：8.05：1.00：1.00：24.94：9.01。苯酚硫酸法测定了两组分的多糖含量分别为91.8％、82.6％；间羟联苯法测定糖醛酸含量分别为4.2％、15.2％；考马斯亮兰法测定蛋白质含量分别为2.7％、1.3％。以上结果表明，PSM-2bA与PSM-2bB为酸性杂多糖。对PSM-2bA和PSM-2bB的结构研究采取了¹³C-NMR分析，部分酸水解，高碘酸氧化和Simth降解，IR分析，GC-MS分析，甲基化分析等方法，甲基化产物经水解、乙酰化后用GC-MS进行测定。结果分析表明：PSM-2bA与PSM-2bB均为多分枝结构；PSM-2bA为具有多分支点的主链连接短支链的结构；其主链的重复结构可能为：PSM-2bB则为长支链的结构。其主体结构由Glc（1→3），Glc（1→2），Gal（1→2，4），Rha（1→3）等单元组成，其主链的重复结构可能为：通过刚果红试验，透射电镜及环境扫描电镜研究和观察了PSM-2bA的显微结构，推导出PSM-2bA的显微结构为由亚基组成的螺旋结构相互缔和，形成了网状高级结构，在天然状态下，PSM-2bA为条带状形态。基于乙酰化效果是影响GC或GC-MS分析结果的关键因素，本文对单糖乙酰化条件也进行了研究。利用气相色谱—质谱联用技术（GC-MS）检测五种常见单糖（木糖、阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖）的乙酰化产物含量，采用正交试验综合考察了还原时间、还原温度、乙酰化温度、乙酰化时间等因素对单糖回收率的影响及规律。结果表明，还原温度和乙酰化时间的影响最为显著。总结出了单糖衍生化最佳的反应条件为还原温度50℃、还原时间2.5h；乙酰化温度90℃、乙酰化时间2.5h。

全文目录

摘要  4-6
Abstract  6-10
第1章引言  10-20
  1. 多糖研究的意义  10
  2. 多糖研究的现状  10-12
    2.1 多糖功能的研究现状  11
    2.2 多糖结构的研究现状  11-12
  3. 多糖结构的研究方法  12-18
    3.1 化学方法在结构分析中的应用  12-15
    3.2 酶学方法的应用  15
    3.3 免疫学方法的应用  15
    3.4 仪器分析方法  15-18
  4. 丹皮多糖的研究现状及课题背景  18-20
    4.1 丹皮多糖(PSM-2b)降血糖作用的研究  18
    4.2 课题背景  18-20
第2章单糖乙酰化条件的研究  20-25
  1. 前言  20
  2. 试剂与仪器  20-21
  3. 实验方法  21-22
    3.1 标准曲线的制作  21
    3.2 正交试验设计  21
    3.3 实验步骤  21-22
  4. 结果与讨论  22-23
  5. 结论  23-25
第3章丹皮多糖一级结构的研究  25-46
  1. 实验材料  25-26
  2. 实验方法  26-35
    2.1 粗多糖的提取及纯化  26
    2.2 多糖样品纯度鉴定  26
    2.3 多糖有关性质的测定  26-28
    2.4 多糖的结构研究方法  28-35
  3. 结果与分析  35-46
    3.1 多糖样品纯度鉴定  35
    3.2 多糖的相关性质  35-37
    3.3 多糖的结构分析  37-44
    3.4 讨论与结论  44-46
第4章丹皮多糖的显微结构观察  46-51
  1. 多糖显微结构的观察方法  46
    1.1 刚果红实验  46
    1.2 透射电镜(TEM)  46
    1.3 环境扫描电镜(ESEM)  46
  2. 丹皮多糖显微结构的分析  46-49
    2.1 刚果红实验结果  46-47
    2.2 透射电镜结果  47-49
    2.3 环境扫描电镜结果  49
  3. 结论  49-50
  4. 展望  50-51
参考文献  51-57
致谢  57-58
攻读硕士学位期间发表的学术论文  58-59
附图  59-64

丹皮多糖的一级结构研究与显微结构的观察

内容摘要

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