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NGF和GM_1联合应用对去细胞异种神经支架移植后神经再生和修复的实验研究

作　者: 焦旭文
导　师: 何仲义
学　校: 宁夏医学院
专　业: 人体解剖与组织胚胎学
关键词: 化学萃取去细胞异种神经支架周围神经损伤异种神经移植神经再生神经生长因子单唾液酸四己糖神经节苷脂
分类号: R651.3
类　型: 硕士论文
年　份: 2006年
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内容摘要

目的(1)采用化学萃取的组织工程学方法制备去细胞异种神经支架,拟为异种神经移植提供理想的支架材料。(2)探索去细胞异种神经支架用于异种神经移植的可行性。(3)探讨NGF和GM1联合应用对去细胞异种神经支架移植后神经再生及功能恢复的影响。方法实验一:切取青紫蓝兔胫神经,以Triton X-100溶液和脱氧胆酸钠溶液按一定浓度和程序进行化学处理。萃取神经及新鲜神经行光镜组织学检测。实验二:48只健康成年SD大鼠随机分为4组:生理盐水(NS)对照组,神经生长因子(NGF)治疗组,单唾液酸四己糖神经节苷脂(GM1)治疗组,神经生长因子与单唾液酸四己糖神经节苷脂(NGF+GM1)联合治疗组。动物分别存活4W、8W,不同时段各组为6只。以上四组大鼠分别以经NS液、NGF液、GM1液、NGF液和GM1液浸泡10mm长度的去细胞异种神经支架桥接大鼠坐骨神经缺损结合术后术侧小腿肌内分别注射NS液、NGF液、GM1液、NGF液和GM1液各0.1ml,每日1次,连续2周。各组分别在术后第4周、8周观察大鼠失神经改变情况及再生神经的大体形态;测定坐骨神经功能指数(SFI);神经电生理测定坐骨神经运动传导速度恢复率(MNCV%)和小腿腓肠肌复合动作电位波幅恢复率(CMAP%);再生神经行辣根过氧化物酶逆行示踪;测定小腿三头肌湿重恢复率;移植体及其近、远段和近、远端吻合口的神经纤维行HE染色、半薄切片行甲苯胺蓝染色、神经微丝(NF)免疫组织化学染色和S-100免疫组织化学染色。结果实验一:去细胞异种神经支架的延展性及韧弹性良好。细胞和髓鞘被彻底清除,神经基底膜、神经内膜、神经束膜和神经外膜被保留。实验二:在同一时相点联合用药组坐骨神经功能指数(SFI)、坐骨神经运动传导速度恢复率、小腿腓肠肌复合动作电位波幅恢复率(CMAP%)、术侧L3-L5脊神经节和L3-L5脊髓节段前角运动细胞的HRP标记细胞数、小腿三头肌湿重恢复率、移植体及远段有髓纤维计数均优于单独用药组(P<0.05),三者又均优于生理盐水组(P<0.05)。在同一时相点形态学观察结果:各组神经移植体粗细基本正常,表面大量血管分布,与周围组织轻度粘连;联合用药组较其他三组再生神经纤维更加密集、排列规则整齐,再生神经纤维流畅通过吻合口,移植体雪旺细胞(SC)大量增殖,移植体中央及远段内的有髓神经纤维密度、直径高于单独用药组,微束之间结缔组织少,接近于正常。结论实验一:Triton X-100溶液和脱氧胆酸钠溶液化学处理方法,可有效地清除兔周围神经中的细胞及髓鞘,该神经支架保持了网管柱状组织结构,保留了雪旺细胞(SC)基底膜、神经内膜、神经束膜和神经外膜。实验二:(1)本实验用化学萃取的方法制备的去细胞异种神经支架能成功地修复异种周围神经缺损。(2)神经生长因子(NGF)或单唾液酸四己糖神经节苷脂(GM1)单独应用可以促进去细胞异种神经支架移植的神经再生与功能恢复。(3)NGF和GM1联合应用促进去细胞异种神经支架移植的神经再生与功能恢复的效果优于单独用药组。NGF和GM1在周围神经损伤修复中是一对具有协同作用的因子。(4)去细胞异种神经支架移植前药物浸泡结合术后靶肌肉注射NGF和GM1是一种较好治疗外周神经损伤的方法。

全文目录

摘要  3-5
ABSTRACT  5-10
实验一  10-20
  前言  10-12
  材料与方法  12-16
  结果  16-17
  讨论  17-19
  结论  19-20
实验二  20-41
  前言  20-21
  材料与方法  21-27
  结果  27-36
  讨论  36-40
  结论  40-41
参考文献  41-46
综述  46-54
  综述参考文献  51-54
致谢  54-55
攻读学位期间发表的学术论文  55-56
个人简历  56

NGF和GM_1联合应用对去细胞异种神经支架移植后神经再生和修复的实验研究

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