学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

核转录因子激活蛋白2α对肺腺癌A549细胞血管内皮生长因子基因/蛋白质表达的影响及意义

作　者: 何奕
导　师: 周锐
学　校: 中南大学
专　业: 内科学
关键词: 肺癌激活蛋白-2α 血管内皮生长因子 A459细胞株
分类号: R734.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
下　载: 48次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

目的：观察激活蛋白-2α(activator protein-2 alpha，AP-2α)对肺腺癌A549细胞株血管内皮细胞生长因子(Vascular endothelial cell growth factor, VEGF)基因和蛋白表达的影响，以及顺铂干预下AP-2α调节A549细胞VEGF表达的变化，探讨AP-2α在肺癌发生发展中的作用和机制。方法：1、运用转基因技术，以不同浓度的Ad-LacZ(10，30，50 MOI)转染A549细胞，用X-gal染色鉴定转染效率；2、用50 MOI，100MOI的Ad-AP-2α转染A549细胞24小时，采用免疫组化法及差异表达RT-PCR法检测不同转染浓度的A549细胞VEGF蛋白质／基因的表达水平；3、用10mg／1DDP分别联合50 MOI，100 MOI的Ad-AP-2α转染A549细胞24小时，采用免疫组化法及差异表达RT-PCR法检测DDP干预下不同转染浓度的A549细胞VEGF蛋白质／基因的表达水平；结果：1、用10MOI，30MOI，50MOI的Ad-LacZ分别转染A549细胞24小时后，其转染率分别为42.1％，76.8％，91.3％。选用50MOIAd-LacZ的腺病毒介导的基因能进入90％的细胞内，符合实验要求。2、A549细胞在转染不同浓度的Ad-AP-2α24小时后，VEGF蛋白质及mRNA的表达水平较转染前显著增高，且随转染倍数增加而增强，呈剂量依赖性(P＜0.05)；3、在顺铂干预情况下，A549细胞在转染不同浓度的Ad-AP-2α24小时后，VEGF蛋白质及mRNA的表达水平较转染前增加，并随转染倍数增加而增强(P＜0.05)；结论：1、AP-2α对肺腺癌A549细胞VEGF蛋白质／基因表达有促进作用，提示AP-2α在肺癌的发生发展中可能起促肿瘤生长样作用。2、顺铂干预下AP-2α仍能上调A549细胞VEGF表达，提示AP-2α可能影响肺癌对化疗药物顺铂的敏感性。

全文目录

中文摘要  4-6
英文摘要  6-8
目录  8-10
缩略语表  10-11
第一章前言  11-13
第二章材料和方法  13-20
  2.1 实验材料和仪器  13-15
    2.1.1 细胞系  13
    2.1.2 主要试剂  13-14
    2.1.3 主要试剂的配制  14
    2.1.4 主要仪器设备  14-15
    2.1.5 引物合成  15
  2.2 方法  15-19
    2.2.1 细胞培养  15
    2.2.2 实验分组  15-16
    2.2.3 细胞内基因转染  16-17
      2.2.3.1 待转染细胞的准备  16
      2.2.3.2 腺病毒介导Lac Z基因转染率测定  16
      2.2.3.3 腺病毒介导的LacZ基因转染  16-17
      2.2.3.4 腺病毒介导的AP-2α基因转染  17
    2.2.4 免疫组化学法检测VEGF蛋白表达  17-18
    2.2.5 逆转录—聚合酶链反应(RT-PCR)  18-19
      2.2.5.1 细胞RNA提取  18
      2.2.5.2 逆转录反应  18-19
      2.2.5.3 PCR反应  19
      2.2.5.4 RT-PCR产物琼脂糖凝胶电泳  19
      2.2.5.5 半定量分析  19
  2.3 统计学分析  19-20
第三章结果  20-27
  3.1 腺病毒转染率测定  20
  3.2 AP-2A基因对细胞内VEGF蛋白表达的影响  20-21
  3.3 AP-2A基因对细胞VEGFMRNA表达的影响  21-22
  3.4 DDP干预后AP-2A基因对细胞内VEGF蛋白表达的影响  22
  3.5 DDP干预后AP-2A基因对细胞内VEGFMRNA表达的影响  22-24
  3.6 实验结果图  24-27
第四章讨论  27-31
结论  31-32
参考文献  32-36
综述  36-45
致谢  45

核转录因子激活蛋白2α对肺腺癌A549细胞血管内皮生长因子基因/蛋白质表达的影响及意义

内容摘要

全文目录

相似论文