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奶牛乳房炎基因工程亚单位疫苗实验免疫研究

作　者: 崔焕忠
导　师: 钱爱东
学　校: 吉林农业大学
专　业: 预防兽医学
关键词: 奶牛隐性乳房炎疫苗 ELISA
分类号: S852.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2004年
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引　用: 7次
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内容摘要

本文从生产实践出发，对金黄色葡萄球菌基因工程亚单位疫苗防治奶牛乳房炎进行了实验免疫研究，探讨了疫苗免疫对奶牛乳房炎发病率及生产性能等方面的影响，建立了检测特异性抗体的ELISA方法，并根据统计学方法建立了血清OD值与效价之间的回归曲线和回归方程，对疫苗免疫后血清中特异性抗体消长规律等方面作了较为详细的研究。乳房炎是奶牛的一种常见病、多发病，其中又以隐性乳房炎为主。隐性乳房炎由于没有临床明显可见症状，因此一般多应用一些特殊的检查方法进行诊断。奶牛隐性乳房炎的检测方法很多，本试验采用了SMT法、苛性钠法、过氧化氢法及BTB法等四种较为常用的方法，对供试奶牛173头进隐性乳房炎检测。经综合判定，隐性乳房炎阳性牛89头，占51.45％，阳性乳区181个，阳性率26.66％；对181个阳性乳样进行细菌分离鉴定，有156个乳区共分离到细菌225株，细菌检出率为82.54％。分离到的细菌中，以金黄色葡萄球菌、停乳链球菌和无乳链球菌为主，分别占40.44％、19.11％和18.22％，其他还有大肠杆菌、乳房链球菌及表皮葡萄球菌等。根据试验需要，在供试奶牛中，按不同情况挑选60头，作为试验组和对照组。A组为经产隐性乳房炎阳性牛10头，B组为经产健康牛10头，C组为初产健康牛10头，对照组为与各试验组相对应的同期、同舍、同种情况的奶牛各10头。试验组于臀部皮下注射1ml制备的疫苗，连续注射3次，每次间隔15天，并在每次注射疫苗和最后一次注射后1、2、3、4和5个月时分别采血10ml，分离血清，将血清-20℃冷冻保存，以备进行特异性抗体检测。在三免后第四个月时，对各免疫组与其相应的对照组之间的隐性乳房炎发病率、头目均产奶量等进行了统计分析，发现免疫组的隐性乳房炎发病率明显低于对照组，有效率分别为55.6％、66.7％和50.0％，而产奶量明显提高，增加12.84％、10.29％和9.10％，从临床角度证明了疫苗的使用价值。根据常规的ELISA方法，建立了检测本疫苗的血清特异性抗体的ELISA检测方法，并对条件进行优化，建立检测特异性抗体的ELISA标准程序，应用此ELISA方法检测试验奶牛的特异性抗体的水平，监测免疫后特异性抗体的消长规律，为该疫苗临床应用提供依据。免疫组在二免，血清特异性抗体水平迅速提高，OD值的平均值为1.08，在三免1个月后特异性抗体达到最高值1.80，至三免5个月后，仍然维持较高水平。各免疫组之间特异性抗体效价无差异。为了能更好的用ELISA检测的血清OD值来反应血清特吉林农业大学硕士学位论文奶牛乳房炎墓因工程亚单位疫苗实验免疫研究异性抗体的效价的高低，试验将血清1:1 00倍稀释度下的0D值与对应的血清效价进行了比较，并作了统计学分析，得出了二者之间存在着一定的线性关系，得出了回归方程和回归曲线，回归方程为y一1.62卜0.2441092‘(y为血清1:1的稀释时0D值，x为血清效价的倒数)。并对回归方程的实测值与预测值进行了比较，无显著差异，证明了血清效价在1:1叨倍稀释时的0D值与抗体效价倒数的以2为底的对数成直线关系。可以直接应用血清1:100稀释时0D值表示效价，使检测血清效价更简单方便。通过本试验，建立了检测金黄色葡萄球菌基因工程亚单位疫苗特异性杭体的ELISA方法，并从临床实践角度出发，验证了该疫苗的安全性、可靠性及实用性，可有效预防由金黄色葡萄球菌引起的奶牛隐性乳房炎，为该疫苗的推广应用莫定基础。

全文目录

中文摘要  8-10
英文摘要  10-12
前言  12-14
第一部分文献综述  14-24
第二部分实验内容  24-46
  1 材料与方法  24-29
    1.1 材料  24
    1.2 方法  24-29
      1.2.1 兔抗牛IgG的制备  24-25
      1.2.2 兔IgG酶标抗体的制备  25
      1.2.3 奶牛隐性乳房炎检测  25
      1.2.4 细菌检测  25-26
      1.2.5 泌乳牛临床免疫实验  26
      1.2.6 采血及血清处理  26
      1.2.7 检测血清抗体的ELISA方法的建立  26-27
      1.2.8 特异性试验  27
      1.2.9 重复性试验  27
      1.2.10 稳定性试验  27-28
      1.2.11 标准曲线与回归方程的建立  28-29
  2 结果  29-42
    2.1 隐性乳房炎检测结果  29
    2.2 乳样的细菌检测结果  29-30
    2.3 安全性试验  30
    2.4 临床免疫效果  30-32
      2.4.1 免疫对奶牛隐性乳房炎发病率的影响  30
      2.4.2 免疫对奶牛产奶量的影响  30-32
    2.5 ELISA检测程序的确定  32-36
      2.5.1 抗原最适包被浓度的确定  32-33
      2.5.2 抗原最适包被时间的确定  33
      2.5.3 牛血清最适稀释度的确定  33
      2.5.4 抗原抗体最适作用时间的确定  33-35
      2.5.5 酶标抗体最适作用时间的确定  35-36
      2.5.6 底物反应时间的确定  36
    2.6 ELISA检测程序  36-37
      2.6.1 包被抗原  36
      2.6.2 加待检血清  36
      2.6.3 加兔抗牛酶标抗体  36-37
      2.6.4 加底物  37
      2.6.5 加终止液  37
    2.7 特异性试验  37-38
    2.8 重复性试验  38
    2.9 稳定性试验  38-39
    2.10 标准曲线与回归方程的建立  39-40
    2.11 免疫后特异性抗体水平  40-42
  3 讨论  42-46
    3.1 关于奶牛隐性乳房炎的检测  42
    3.2 关于病原菌分离鉴定  42-43
    3.3 关于疫苗的临床免疫试验  43-44
      3.3.1 关于免疫方案  43
      3.3.2 免疫对奶牛隐性乳房炎发病率的影响  43
      3.3.3 免疫对奶牛产奶量的影响  43-44
      3.3.4 免疫对牛场经济效益的影响  44
    3.4 关于特异性试验  44
    3.5 关于重复性  44
    3.6 关于稳定性  44
    3.7 关于特异性抗体效价监测  44
    3.8 关于疫苗  44-46
结论  46-47
参考文献  47-51
附录  51-53
致谢  53

奶牛乳房炎基因工程亚单位疫苗实验免疫研究

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