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用于防龋DNA疫苗粘膜给药的阳离子脂质体载体的研究

作　者: 奚颖霞
导　师: 甘璐
学　校: 华中科技大学
专　业: 生化与分子生物学
关键词: 非病毒载体阳离子脂质体 DNA脂质复合物转染
分类号: R392.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
下　载: 41次
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内容摘要

基因治疗成功的关键是需要高效、安全和靶向的载体系统,将DNA转移至靶细胞核内进行表达。阳离子脂质体是用于基因治疗中最有前景的非病毒载体系统之一。阳离子脂质体/DNA复合物,也叫脂质复合物,是自组装纳米体系,能将DNA输送至多种类型的细胞中。在本研究中,我们制备了DOTAP/DOPE脂质体,对其与DNA的相互作用进行了理化表征,并研究了它们的体外转染效率。完成的工作包括以下几个方面:(1)薄膜超声法制备DOTAP/DOPE阳离子脂质体,考察确定了此工艺中水化时间与超声时间,并对制得的脂质体的粒径分散性、zeta电位分布、形貌以及初步物理稳定性进行表征。结果表明此制备工艺有较好的重复性。最后制得的阳离子脂质体平均粒径为128.6±4.6 nm,PDI为0.168±0.016,zeta电位为68.7±4.6 mV。在4℃或37℃贮存1个月后,其胶体稳定性较好。(2)制备了阳离子脂质体/DNA复合物,并考察了复合物的理化性质。粒径和电位测试、琼脂糖凝胶电泳的结果表明在N/P比为1.5以上时,DNA与阳离子脂质体形成了稳定且带正电的复合物。核酸酶酶切实验的结果表明复合物能保护DNA抵御核酸酶的降解。我们还对在生理离子强度下制备的复合物进行粒径和电位考察,结果表明在N/P比为3以上时,复合物带正电,且复合物颗粒有成簇聚集现象。此外,我们对动物实验要求的脂质复合物的制备进行摸索。(3)通过对CHO和NIH-3T3细胞的MTT细胞毒性和转染实验表明,复合物的细胞毒性较小;阳离子脂质体可以将DNA转移到两种细胞内得到有效的表达,转染的最佳N/P比为1.5到2。在CHO细胞中的转染效率比NIH-3T3细胞中高。综上所述,DOTAP/DOPE阳离子脂质体与DNA通过静电作用自组装形成的复合物,能有效介导基因的体外转染,为后续的研究打下良好的基础。

全文目录

摘要  4-5
Abstract  5-9
1 绪论  9-18
  1.1 前言  9-10
  1.2 阳离子脂质体  10-13
  1.3 脂质复合物  13-15
  1.4 脂质复合物介导转染的机制  15-17
  1.5 本文研究目的及主要内容  17-18
2 阳离子脂质体制备工艺及表征  18-27
  2.1 引言  18-19
  2.2 材料和方法  19-21
  2.3 结果和讨论  21-26
  2.4 本章小结  26-27
3 阳离子脂质体  27-37
  3.1 引言  27-28
  3.2 材料和方法  28-30
  3.3 结果和讨论  30-35
  3.4 本章小结  35-37
4 体外细胞学评价研究  37-51
  4.1 引言  37-38
  4.2 材料和方法  38-43
  4.3 结果和讨论  43-51
5 全文总结  51-53
致谢  53-54
参考文献  54-59

用于防龋DNA疫苗粘膜给药的阳离子脂质体载体的研究

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