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第二性征发育不良青少年的细胞及分子遗传学分析

作　者: 刘冠楼
导　师: 唐艳平
学　校: 华中科技大学
专　业: 医学遗传学
关键词: 第二性征发育不良 Kallmann综合症核型分析多重PCR FISH KAL-1基因外显子突变
分类号: R588
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

在已婚育龄夫妇中约有15%不育,造成不孕不育的病因包括:器质性病变、内分泌性疾病、神经因素、免疫因素、遗传因素和感染等。第二性征发育不良在不孕不育患者中占有相当大的比例,对于此类患者病因的诊断主要集中在激素水平检测、免疫学检查、细胞遗传学检查,分子遗传学的检查进行较少,其中造成患者第二性征发育不良的Kallmann综合症(Kallmann syndrome, KS)的相关基因的检查开展不多。Kallmann综合症是一种先天性促性腺功能低下和嗅觉障碍联合出现的病症,发病率男性为1/10000,女性为1/50000[1,2]。Kallmann综合症分为遗传型和散发型,当前的研究已发现该病的三种遗传方式(AD,AR,X连锁)及其相关的疾病基因[1,3,4,5],其发病机制是下丘脑完全或不完全丧失合成分泌促性腺激素释放激素(gonadotropin releasing hormone,GnRH)的能力。细胞分子生物学技术已广泛应用于遗传病的诊断,外周血染色体G显带可发现较明显的染色体异常(数目和较明显的结构变化),FISH和多重PCR技术可发现小片段基因的缺失[6,7]。因遗传因素造成的第二性征发育不良患者中,Kallmann患者占有相当比例。近年来随着对该病的重视和筛查力度的加大,发病率有所上升。KS患者大多是成年后因第二性征不明显、不育症或性功能障碍等原因前来就诊,临床上一般是将临床症状和性激素水平作为此病诊断和治疗的定量指标,技术设备成熟的医院已将分子生物学检查引入常规检验,作为该病的治疗参考。KS患者的治疗取决于对本病的早期诊断,并且治疗具有较强的年龄阶段性特征,越早发现越有利于更好的进行针对性治疗[8,9,10],所以对青少年第二性征发育不良患者进行基因检测显得极为重要。该病相关基因中,对KAL-1的研究进行的最早,方法也最为成熟,现已建立起分别针对KAL-1基因大片段缺失的荧光原位杂交法(FISH)和外显子缺失的多重PCR法[11,12]。目的:对2008年3月至2009年2月,在华中科技大学同济医学院遗传室以及其他医院因不育不孕做遗传检查的1357名患者中,尤其是青少年患者,根据登记的患者第二性状特征,选取收集了29例患者作为研究对象,患者均为男性,外生殖器第二性征发育不良,部分病例伴有嗅觉障碍。对其进行KAL-1基因的FISH和多个外显子的PCR检测,分析KAL-1基因的突变情况,讨论其与青少年第二性征发育不良的关系,为临床上对该病的诊断治疗和研究提供参考。方法:按照知情同意原则抽取患者外周血,培养外周血淋巴细胞做常规G显带染色体核型分析,并留存一份细胞悬液,用于做FISH及外显子的PCR检测。无留存细胞悬液的可用手术刀片刮取少量G显带玻片上残留细胞进行多重PCR检测。结果:PCR结果显示,在收集到的29份病例中,有3份KAL-1基因发生突变,突变率约为10.3%,其中一名患者2号外显子缺失,另一同胞兄弟的外显子5号~9号均缺失。FISH结果和PCR基本一致,2号外显子缺失的患者FISH显示正常,而同胞兄弟患者的外显子5~9号缺失,缺失片段过长导致FISH结果为阴性。结论:本次研究中KAL-1基因的突变率为10.3%,所占比例高出文献报道,这与本次实验所选研究对象有关。三例KAL-1基因外显子缺失的患者,均存在自发的青春期发育迟缓,第二性征发育不良。对第二性征发育不良的青少年患者,进行FISH结合多重PCR法筛查KAL-1基因具有重要的临床诊断和治疗意义。

全文目录

英文缩略词及符号表  5-7
中文摘要  7-9
Abstract  9-12
前言  12-14
实验材料  14-19
实验方法  19-26
实验结果  26-34
讨论  34-39
参考文献  39-43
综述  43-52
  参考文献  48-52
致谢  52

第二性征发育不良青少年的细胞及分子遗传学分析

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