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非小细胞肺癌NF-κB表达与顺铂耐药的关系及吴茱萸碱逆转耐药的体外研究
作 者: 农丽
导 师: 伍钢
学 校: 华中科技大学
专 业: 肿瘤学
关键词: 非小细胞肺癌 NF-κB 多药耐药(MDR) 吴茱萸碱 A549/DDP
分类号: R734.2
类 型: 硕士论文
年 份: 2010年
下 载: 56次
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内容摘要
【目的】探讨非小细胞肺癌核转录因子-kappa B(nuclear factor-kappa B,NF-κB)的表达与顺铂耐药的关系及吴茱萸碱(Evodiamine,EV)是否能够有效逆转肺癌耐药株A549/DDP对顺铂的耐药性,及其作用机制是否与NF-κB信号通路有关。【方法】实验分组:A549 +DDP组, A549 +EV组, A549 +EV+ DDP组, A549/DDP +DDP组, A549/DDP +EV组, A549/DDP +EV+ DDP组。采用MTT法检测不同浓度DDP和EV对A549细胞和A549/DDP细胞增殖的影响;以及二者联用时上述作用的变化,并计算IC50及耐药逆转倍数。根据MTT结果,选取适宜的药物作用浓度,重新将两种细胞进行上述分组和EV作用于A549/DDP不同时间后,流式细胞仪检测细胞凋亡情况。免疫细胞化学法和Real-time PCR法测定NF-κB表达差异。RT-PCR检测MDR1, NF-κB, BCL-2, MMP2,VEGF的mRNA表达。Western- blot法检测各组细胞的pIκB-α,pIKKα蛋白表达水平。【结果】A549/DDP对DDP的耐药倍数为8.075倍。加入0.125mg/L,0.25mg/L的EV后,A549/ DDP细胞对DDP的耐药逆转倍数分别为3.668和11.48。当EV与DDP联用时,可明显提高A549/DDP对化疗药的敏感性,凋亡细胞显著增加(P<0.05)。Real-time PCR及免疫细胞化学结果表明在EV作用下NF-κB的表达随着作用浓度的增加和作用时间的延长表达逐渐下调,与对照组比较有统计学意义(P<0.05)。RT-PCR显示在EV作用下检测基因的mRNA表达随着作用浓度的增加和作用时间的延长表达逐渐下降。Western blot法结果提示A549/DDP细胞中pIκB-α的表达水平随着时间的延长逐渐下降,pIKKα表达无显著变化趋势。【结论】吴茱萸碱可以通过影响NF-κB信号通路,促进细胞凋亡,抑制细胞增殖,增加耐药细胞对DDP的敏感性。
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全文目录
中文摘要 5-7 英文摘要 7-9 前言 9-11 实验材料 11-15 实验方法 15-20 结果 20-29 讨论 29-34 小结 34-35 参考文献 35-39 综述 39-48 参考文献 45-48 附录 48-49 致谢 49
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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 呼吸系肿瘤 > 肺肿瘤
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