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地黄寡糖对HepG2细胞（人肝癌细胞株）胰岛素抵抗的改善作用及机制研究

作　者: 郭丽民
导　师: 贾正平；张汝学
学　校: 兰州大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 地黄寡糖 HepG2 胰岛素抵抗 过氧化物酶体增殖物激活受体α 葡萄糖转运蛋白2
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
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引　用: 4次
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内容摘要


目的：以中药地黄的提取物——地黄寡糖为研究对象，采用HepG2细胞株，运用现代药理学研究方法和分子生物学研究方法，探讨研究地黄寡糖对肝胰岛素抵抗的改善作用及分子机制。方法：用四甲基偶氮唑盐（MTT）方法检测HepG2细胞的增殖；同时采用高胰岛素诱导HepG2细胞建立胰岛素抵抗细胞模型；检测地黄寡糖对胰岛素抵抗HepG2细胞葡萄糖消耗的影响；分别采用葡萄糖-6-磷酸脱氢酶偶联比色法、乳酸脱氢酶偶联比色法、钼酸铵定磷法及蒽酮法测定胰岛素抵抗HepG2细胞内葡萄糖激酶（GK）、磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶（PEPCK）、葡萄糖-6-磷酸酶（G-6-Pase）的活性和糖原含量；运用RT-PCR技术，检测地黄寡糖对胰岛素抵抗HepG2细胞内一些关键基因表达的影响，包括转录调控因子和调控细胞分化、脂代谢的过氧化物酶体增殖物激活受体α（PPAR-α）和胰岛素受体（IR）；调节体内葡萄糖代谢的重要细胞因子葡萄糖转运蛋白4（GLUT4）和葡萄糖转运蛋白2（GLUT2）。结果：在中浓度葡萄糖培养基中，高浓度(10～30mg·L-1)的地黄寡糖促进HepG2细胞的增殖，低浓度(0.1～3mg·L-1)则抑制HepG2细胞的增殖，作用呈明显的量效关系；地黄寡糖(0.1～30mg·L-1)可促进HepG2细胞的葡萄糖消耗，最佳浓度为10mg·L-1；地黄寡糖(0.1～100mg·L-1)能够促进胰岛素抵抗HepG2细胞的葡萄糖消耗，增强对胰岛素的敏感性，并且还能够明显对抗高胰岛素诱导的胰岛素抵抗效应，在一定程度上预防或逆转胰岛素抵抗的发展。地黄寡糖可降低胰岛素抵抗HepG2细胞内葡萄糖-6-磷酸酶和磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶的活性，增强葡萄糖激酶的活性和增加糖原含量，改善HepG2细胞胰岛素抵抗的状态。地黄寡糖能够促进胰岛素抵抗HepG2细胞中PPAR-α、IR、GLUT4 mRNA的表达；能够明显降低GLUT2基因mRNA的表达。结论：高浓度地黄寡糖促进HepG2增殖，低浓度则抑制其增殖；地黄寡糖可明显地促进胰岛素抵抗HepG2细胞葡萄糖消耗，在一定程度上预防或逆转胰岛素抵抗的发展；地黄寡糖可以抑制胰岛素抵抗HepG2细胞的糖异生作用，减少细胞内源性葡萄糖的产生，同时加快糖酵解的进行，促进细胞对葡萄糖的利用，增强细胞内的糖原含量，对HepG2胰岛素抵抗具有明显的改善作用，其机制可能与激活PPAR-α、调节HepG2内IR及GLUT2 mRNA的表达有关。该项研究初步阐明了地黄寡糖改善肝胰岛素抵抗地作用及其分子机制，为地黄寡糖防治2型糖尿病提供了有益的数据。

全文目录


中文摘要  4-6
英文摘要  6-8
英文缩略词表  8-9
目录  9-11
第一章 研究背景回顾  11-28
  1 综述 寡糖的药理作用和机制研究进展  11-16
    1.1 寡糖的分类  11
    1.2 寡糖的药理作用  11-15
    1.3 存在的问题和展望  15-16
  2 研究背景及立题依据  16-21
    2.1 地黄寡糖具有降血糖作用和改善受损糖代谢的作用  16-18
    2.2 HepG2细胞株  18-19
    2.3 立题依据  19-21
  3 研究路线、研究内容及研究意义  21-22
    3.1 研究内容  21
    3.2 研究路线  21-22
    3.3 研究意义  22
  参考文献  22-28
第二章 HepG2胰岛素抵抗细胞模型的建立与评价  28-36
  1 材料与方法  28-31
  2 结果  31-33
    2.1 不同胰岛素浓度和胰岛素作用时间对HepG2细胞胰岛素抵抗的影响  31-32
    2.2 HepG2胰岛素抵抗细胞模型持续时间的研究  32-33
    2.3 胰岛素抵抗模型细胞的形态学变化  33
  3 讨论  33-34
  参考文献  34-36
第三章 地黄寡糖对HepG2细胞胰岛素抵抗的影响  36-56
  1 材料与方法  36-40
  2 结果  40-51
    2.1 地黄寡糖对HepG2细胞葡萄糖消耗的影响  40-41
    2.2 地黄寡糖对不同葡萄糖浓度培养基中葡萄糖消耗的影响  41-42
    2.3 地黄寡糖对不同胰岛素浓度培养基中葡萄糖消耗的影响  42-43
    2.4 地黄寡糖对HepG2细胞增殖的影响  43-44
    2.5 地黄寡糖对胰岛素抵抗HepG2细胞葡萄糖消耗的影响  44-46
    2.6 HepG2细胞胰岛素抵抗模型在药物筛选中的应用  46-48
    2.7 地黄寡糖对HepG2细胞胰岛素抵抗的影响  48-49
    2.8 地黄寡糖对胰岛素抵抗HepG2细胞葡萄糖-6-磷酸酶、PEPCK、葡萄糖激酶活性和糖原含量的影响  49-51
  3 讨论  51-53
  参考文献  53-56
第四章 地黄寡糖改善HepG2细胞胰岛素抵抗的机制研究  56-72
  1 材料与方法  56-63
  2 结果  63-65
    2.1 地黄寡糖对胰岛素抵抗HepG2细胞PPAR-α表达的影响  63
    2.2 地黄寡糖对胰岛素抵抗HepG2细胞胰岛素受体(IR)表达的影响  63-64
    2.3 地黄寡糖对胰岛素抵抗HepG2细胞GLUT4表达的影响  64
    2.4 地黄寡糖对胰岛素抵抗HepG2细胞GLUT2表达的影响  64-65
  3 讨论  65-68
  参考文献  68-72
结论  72-73
硕士期间研究成果及参与的科研工作  73-74
致谢  74-75
附录:3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗模型的研究及在药物筛选中的应用  75-80

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中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中药学 > 中药药理学 > 中药实验药理
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