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溶酶体酶抑制剂对新生期反复惊厥大鼠急性期和远期基因表达和行为改变的影响

作　者: 闫建珍
导　师: 倪宏
学　校: 苏州大学
专　业: 儿科学
关键词: 惊厥新生期自噬行为 PRG-1 CBI
分类号: R720.597
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的:探讨三氟乙醚致新生期大鼠反复惊厥对其生长发育及远期认知能力的影响和CathepsinB Inhibitor(CBI)的干预作用及其信号通路。方法:90只生后6d(用P6表示,下同)的健康Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分为三组(n=30):对照(CONT)组、反复惊厥(RS)组及CBI组。通过三氟乙醚反复吸入制作新生期大鼠反复惊厥(Recurrent neonatal seizures,RS)动物模型: RS组每日吸入三氟乙醚诱导惊厥发作5次,每次间隔30min,连续9d;CONT组同样操作但不吸入三氟乙醚;CBI组于惊厥前腹腔注射CBI(总量2μl),同样方法吸入三氟乙醚诱导惊厥发作,方法同RS组。分别于生后不同时间段通过观察大鼠体质量变化,耳廓分离,门齿萌出数目等评价其生长发育;通过平面翻正试验,悬崖回避试验,空中翻正反射试验评价其神经发育;一月龄时采用Morris水迷宫以及旷场行为试验,检测大鼠的学习记忆功能及认知情感能力。并于末次惊厥后1.5h、3h、6h、24h及P35五个时间点(n=6)取大脑海马及皮层组织,采用免疫印迹技术(Western blot)检测自噬标记蛋白LC3和beclin-1,溶酶体相关蛋白CathepsinB,凋亡相关蛋白bcl-2,可塑性相关基因-1(PRG-1)的表达。所有数据均采用SPSS16.0软件包统计。结果:1、行为学结果:(1)体质量增长7d-14d RS组明显低于CONT组与CBI组,差异具有显著性(P<0.01)。(2)神经发育指标显示悬崖回避时间,日龄P12时RS组历时延长于CBI组,有统计学意义(P<0.05)。(3)旷场行为测试:RS组水平运动次数少于CONT组,RS组垂直运动少于CONT组和CBI组,有显著差异(P<0.01)。(4)Morris水迷宫检测:〈1〉三组大鼠逃避潜伏期于测试第1d至第5d逐渐缩短,第5d RS组逃避潜伏期明显长于CONT组,CBI组明显短于RS组,具有显著差异(P<0.05);〈2〉RS组搜寻策略较CONT组和CBI组表现较差,具有统计学意义(P<0.05);〈3〉三组穿越平台次数无明显差异(P>0.05)。2、海马和皮层免疫印迹法显示:(1)RS组在1.5h、3h、6h、24h各时间点LC3-II/LC3-I、beclin-1、CathepsinB的表达明显高于CONT组(P<0.05),而bcl-2表达下调;CBI组于1.5h、3h、6h、24h各时间点LC3-II/LC3-I、beclin-1、CathepsinB的表达明显低于RS组(P<0.05),而bcl-2表达升高;P35时间点3组之间各蛋白表达无差异(P>0.05)。(2)末次惊厥后1.5h、3h、6h、24h海马及皮层PRG-1的表达三组之间比较无明显差异(P>0.05);P35时间点RS组PRG-1蛋白水平较对照组显著增高(P<0.01),CBI组与RS组比较PRG-1的值显著降低(P<0.05)。结论:1、三氟乙醚诱导新生期反复惊厥致急性期海马及大脑皮层自噬相关蛋白LC3、beclin-1、CathepsinB表达明显上调,抗凋亡蛋白bcl-2表达下调,自噬及凋亡信号被激活;同时造成远期学习能力的损害,并可能与前脑PRG-1表达上调有关。2、惊厥发作前应用溶酶体酶抑制剂CBI能显著调节惊厥所致急性期海马及大脑皮层LC3、beclin-1、CathepsinB、bcl-2的表达异常;并下调远期前脑PRG-1表达,减轻反复惊厥所致神经行为损伤。3、本研究表明,CBI通过自噬-溶酶体及凋亡信号途径实现对新生期惊厥性脑损伤的保护作用。

溶酶体酶抑制剂对新生期反复惊厥大鼠急性期和远期基因表达和行为改变的影响

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