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金龟子绿僵菌代谢产物中有效成分的初步研究

作　者: 路宏朝
导　师: 杨鸣琦
学　校: 西北农林科技大学
专　业: 基础兽医学
关键词: 金龟子绿僵菌 代谢产物 苦马豆素 分离提取
分类号: R378
类　型: 硕士论文
年　份: 2006年
下　载: 117次
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内容摘要


目的:对金龟子绿僵菌的代谢产物进行初步的研究,验证其产物中苦马豆素(swainsonine,SW)的存在,为SW的来源提供新的研究思路;同时分析代谢产物中的其它有效成分,为进一步开发研究金龟子绿僵菌的药用价值奠定基础。方法:①采用马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)培养基对金龟子绿僵菌进行定期的传代培养;②用查氏蛋白胨培养基对金龟子绿僵菌进行发酵培养,收集发酵液;③运用气相色谱法对发酵液中的SW进行定性定量分析;④首先采用离心、过滤、浓缩等方法对发酵液进行预处理,再运用薄层层析检测技术对发酵液中的活性成分进行跟踪,同时采用反复萃取、层析分离、真空升华等化学提取方法对发酵液分离提取;⑤运用气相色谱法对升华提取物进行定性分析;⑥采用GC-MS联用分析技术,对提取物进行结构分析鉴定。结果:①传统的马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)培养基即可用于金龟子绿僵菌的传代,且该菌生长状态良好;②用于发酵培养的查氏蛋白胨培养基中选用葡萄糖和蛋白胨的质量比为2:1,培养温度为26℃,pH值为6.5,符合该菌正常生长的范围;③通过气相色谱法测定,发酵液中所含SW的含量为10.2131mg·L-1,与外文报道的浓度为9.0400 mg·L-1基本一致;④真空升华得到SW的粗品,再经气相色谱法对其粗品进行定性定量分析,结果表明此粗品中含有SW,且含量为44.94%。经折算,平均每升发酵液提取SW 0.0038g。而发酵液中所测得SW的含量为10.2131mg·L-1,因此提取率为37.21%;⑤采用GC-MS联用法,鉴定出5种单体化合物,分别为棕榈酸甲酯、1-甲基-7异丙基菲、1,4-双甲基-(4-甲苯基)-1,3二烯烃、A′-Neogammacer-22(29)-en-3-ol,acetate、邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯;7种未知化合物,其中包括两种同分异构体。小结:经初步的研究结果表明,金龟子绿僵菌的代谢产物中确实含有SW,初步分离后,得到了SW粗品,同时还得到并鉴定出该代谢产物中含有其它的5种已知结构的化合物,和7种未知结构的化合物。据此可说明本试验所探索的分离提取方法是具有可行性的,但SW的损失很大,提取率较低,因此本方法需要完善和成熟;五种已知的单体化合物具体的生物活性作用还需要进一步研究证实;对于未知结构的化合物也需要进一步的结构分析;同时还应探索别的分离提取方法去寻求代谢产物中其它的有效活性物质;研究SW在金龟子绿僵菌代谢过程中的生物合成机制,希望以此能来提高SW的产量。

全文目录


摘要  5-6
ABSTRACT  6-11
第一章 文献综述  11-28
  1 从天然产物中寻找活性物质  11-13
    1.1 天然产物出现的背景  11
    1.2 从微生物中寻找活性物质  11-12
    1.3 真菌次级代谢产物的多样性  12-13
    1.4 小结  13
  2 金龟子绿僵菌的研究现状  13-16
    2.1 昆虫病原真菌的研究进展  13-14
    2.2 金龟子绿僵菌的研究概况  14-15
    2.3 金龟子绿僵菌的生长条件  15-16
  3 SW 的研究概况  16-23
    3.1 SW 的发现  16-17
    3.2 SW 的理化性质  17-18
    3.3 SW 的来源  18-19
    3.4 SW 的药用研究  19-21
    3.5 SW 的检测分析  21-23
    3.6 SW 的利用前景  23
  4 微生物代谢产物中活性物质的分离提取  23-26
    4.1 提取的过程  23-24
    4.2 提取纯化的基本方法  24-25
    4.3 SW 的提取分离  25-26
  5 本研究的目的及设计思路  26-28
    5.1 本研究的目的  26-27
    5.2 本研究的设计思路  27-28
第二章 金龟子绿僵菌的液体发酵培养及苦马豆素的测定  28-32
  1. 材料与方法  28-30
    1.1 材料  28-29
    1.2 方法  29-30
  2 结果  30-31
    2.1 金龟子绿僵菌的形态  30
    2.2 发酵液的性状  30
    2.3 代谢产物中SW 的含量  30-31
  3 讨论  31-32
第三章 金龟子绿僵菌次级代谢产物的分离提纯  32-39
  1 材料与方法  32-35
    1.1 材料  32-33
    1.2 方法  33-35
  2 结果  35-37
    2.1 发酵液的预处理  35
    2.2 薄层层析检测结果  35
    2.3 柱层层析结果  35
    2.4 真空升华结果  35-37
    2.5 气相色谱检测结果  37
  3 讨论  37-39
第四章 金龟子绿僵菌代谢产物中提取物的结构鉴定  39-48
  1 材料与方法  39-40
    1.1 材料  39
    1.2 方法  39-40
  2 结果  40-46
    2.1 熔点测定结果  40
    2.2 气相色谱质谱联用结果  40-46
  3 讨论  46-47
  4 小结  47-48
结论  48-49
参考文献  49-54
致谢  54-55
作者简介  55

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中图分类: > 医药、卫生 > 基础医学 > 医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学） > 病原细菌
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