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奥地利黑松组织培养研究

作　者: 王小玲
导　师: 樊军锋
学　校: 西北农林科技大学
专　业: 林木遗传育种
关键词: 奥地利黑松成熟合子胚器官发生再生植株
分类号: S791.256
类　型: 硕士论文
年　份: 2006年
下　载: 127次
引　用: 3次
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内容摘要

本研究以从德国购买的奥地利黑松优良种源成熟合子胚为起始外植体,通过器官发生途径研究了奥地利黑松在组织培养条件下,不定芽的诱导、分化、伸长、生根及再生植株移栽技术。结果表明,奥地利黑松种子在4℃低温下预处理15d,自来水过夜浸泡,使其膨胀后,用0.1%高锰酸钾溶液消毒30min,无菌水冲洗干净后剥掉种皮,再用70%酒精漂洗45s,0.1%升汞消毒8min,无菌水冲洗干净后,剥取合子胚接种到培养基上,污染率和褐化率较低。并且成熟合子胚水平放置在诱导培养基上时,不定芽诱导率高,不定芽原基形成一般发生在萌发的子叶或靠近子叶的上胚轴处。奥地利黑松器官发生研究中,不定芽诱导分化的最优培养基为3/4WPM+6-BA2.0mg.L^-1+蔗糖30g.L^-1,一个月后可分化出大量不定芽,诱导率大于55%;最优增殖培养基为GD+6-BA0.8 mg.L^-1+NAA0.01 mg.L^-1+白糖50g.L^-1,增殖率达900%;之后继代于MS+ NAA 0.02 mg.L^-1+AC1.0g.L^-1的培养基上进行不定芽伸长生长,GA3抑制丛生芽的伸长。本研究还以奥地利黑松种子在无菌培养基和营养土中培养的实生苗带子叶顶芽为外植体诱导丛生芽。结果发现,营养土中培养的实生苗带子叶顶芽在丛生芽诱导过程中,由于污染率较高,而大大影响试验结果。无菌实生苗带子叶顶芽丛生芽诱导的最佳培养基为1/2GD+6-BA3.0 mg.L^-1+NAA0.05 mg.L^-1+IBA0.2 mg.L^-1+蔗糖20g.L^-1,增殖系数达6.23,且以生长20-30d苗龄的实生苗为最优外植体。本论文最后研究了奥地利黑松不定芽的生根及再生植株移栽技术。研究表明,奥地利黑松不定芽试管内生根明显优于试管外生根。试管内生根的的适宜培养基为WPM+NAA0.02 mg.L^-1+IBA0.5 mg.L^-1+蔗糖2.0%,生根率最高可达55%。6-BA和活性炭的加入不利于不定芽试管内生根。两种生长素混合使用效果比单独使用一种生长素的效果要好。奥地利黑松再生植株移栽过程中,受到多种因素的影响,例如,出瓶炼苗、基质、杀菌剂及浸泡时间,培养条件等。如何进一步提高不定芽生根率及再生植株移栽成活率,尚需进一步的深入研究。上述研究为奥地利黑松优良无性系在我国的快速繁殖、以及发展奥地利黑松的器官发生诱导技术,进而开展遗传转化和工厂化育苗研究奠定了良好的基础。

全文目录

摘要  4-5
ABSTRACT  5-7
目录  7-10
第一章文献综述  10-23
  前言  10
  1.1 松属树种组织培养研究概况  10-14
    1.1.1 国外研究进展  10-12
    1.1.2 国内研究进展  12-14
  1.2 松属树种组培繁殖的类型  14-20
    1.2.1 器官发生  14-18
    1.2.2 体细胞胚胎发生  18-20
  1.3 松属树种组培繁殖研究的展望与存在的问题  20-22
    1.3.1 松属树种器官发生研究的展望与存在的问题  20-21
    1.3.2 松属树种体细胞胚胎发生研究的展望及存在的问题  21-22
  1.4 奥地利黑松的基本特征及研究进展  22-23
    1.4.1 奥地利黑松的形态特征  22
    1.4.2 分布  22
    1.4.3 研究进展  22
    1.4.4 用途  22-23
第二章奥地利黑松离体胚培养诱导不定芽研究  23-33
  2.1 材料和方法  23-24
    2.1.1 材料  23
    2.1.2 方法  23-24
    2.1.3 培养条件  24
  2.2 结果与分析  24-31
    2.2.1 外植体表面消毒方式对不定芽诱导的影响  24-26
    2.2.2 基本培养基对不定芽诱导的影响  26
    2.2.3 成熟胚的接种位置取向对不定芽诱导的影响  26
    2.2.4 基本培养基大量元素浓度对不定芽诱导的影响  26-27
    2.2.5 细胞分裂素对不定芽诱导的影响  27-28
    2.2.6 6-BA 与NAA 组合对不定芽诱导的影响  28-30
    2.2.7 蔗糖浓度对不定芽诱导的影响  30
    2.2.8 外植体种类对不定芽诱导的影响  30-31
  2.3 结论与讨论  31-33
第三章奥地利黑松带子叶顶芽诱导丛生芽研究  33-41
  3.1 材料和方法  33-34
    3.1.1 材料  33
    3.1.2 方法  33-34
  3.2 结果与分析  34-39
    3.2.1 基本培养基对带子叶顶芽诱导丛生芽的影响  34-35
    3.2.2 培养基大量元素浓度对带子叶顶芽诱导丛生芽的影响  35-36
    3.2.3 生长调节剂对带子叶顶芽诱导丛生芽的影响  36-37
    3.2.4 赤霉素（GA_3）对带子叶顶芽诱导丛生芽的影响  37
    3.2.5 蔗糖浓度对带子叶顶芽诱导丛生芽的影响  37-38
    3.2.6 外植体生理状态对带子叶顶芽诱导丛生芽的影响  38-39
  3.3 结论与讨论  39-41
第四章奥地利黑松不定芽的增殖与伸长研究  41-50
  4.1 材料与方法  41-42
    4.1.1 材料的来源  41
    4.1.2 方法  41
    4.1.3 培养条件  41-42
  4.2 结果与分析  42-47
    4.2.1 影响奥地利黑松不定芽增殖的因素  42-45
    4.2.2 影响奥地利黑松丛生芽伸长的因素  45-47
  4.3 结论与讨论  47-50
    4.3.1 奥地利黑松不定芽的增殖  47-48
    4.3.2 奥地利黑松丛生芽的伸长  48-50
第五章奥地利黑松组培苗生根及再生植株移栽技术研究  50-60
  5.1 奥地利黑松不定芽的生根  50-55
    5.1.1 材料和方法  50
    5.1.2 结果与分析  50-55
  5.2 奥地利黑松再生植株的移栽  55-58
    5.2.1 奥地利黑松再生植株的出瓶移栽  55-56
    5.2.2 基质对奥地利黑松再生植株移栽的影响  56-57
    5.2.3 杀菌剂及浸泡时间对移栽成活率的影响  57-58
  5.3 结论与讨论  58-60
第六章总结与讨论  60-62
  6.1 主要结论  60
  6.2 讨论  60-62
参考文献  62-70
致谢  70-71
作者简介  71

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