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甘蓝型油菜矮化突变体“NDF-1”抑制性消减文库的构建和BnD5、BnD11基因全长cDNA的克隆

作　者: 李小艳
导　师: 王茂林
学　校: 四川大学
专　业: 遗传学
关键词: 甘蓝型油菜矮化抑制性消减杂交 RACE-PCR 氨基酸
分类号: Q943.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2006年
下　载: 210次
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内容摘要

“NDF-1”是利用快中子轰击及硫酸二乙酯(DES)联合处理甘蓝型油菜高秆品系，然后再自交纯合后育成的矮化突变体，其株高仅及亲本的三分之一。成熟植株除比野生型低矮之外，叶色上也较野生型绿些，而且叶片比野生型褶皱，真叶也有较野生型提前衰老的迹象。为了探究矮化性状突变的分子机理，本实验应用抑制性消减杂交(suppression subtractive hybridization，SSH)技术构建了甘蓝型油菜矮化突变体“NDF-1”的抑制性消减文库。经菌落PCR检测，消减文库的有效重组率为90％，其中插入的cDNA片段大小在100bp到1000bp之间。再通过斑点杂交对100个随机挑选的含有插入片段的阳性克隆进行初步地差异筛选，然后选取32个阳性克隆进行序列测定。用DNAMAN序列分析软件对测序结果分析比较，cDNA序列在GenBank数据库中进行同源性比较。结果显示，有3个克隆未出现测序结果；在另外的29个克隆中，4号和11号克隆完全重复，6号和12号克隆完全重复，非重复率为86.2％，其中，17个序列与已知蛋白或推测蛋白质(putative protein)有着较高的同源性，功能涉及到以下几方面：第二信使、转录因子、衰老、蛋白质降解、脂肪酸代谢、脂肪酸转运及储存，其余的12个克隆与未知蛋白质(unknown protein)或假想蛋白质(hypothetical protein)同源，暂不能确定功能。以甘蓝型油菜(Brassica napus)矮化突变体“NDF-1”苔期的顶端和侧生幼叶为材料提取RNA，在已经构建的油菜矮化突变体“NDF-1”消减文库中选取一个已经测序的编码半胱氨酸蛋白酶的基因片段和一个编码植物特有的转录

全文目录

中文摘要  5-7
英文摘要  7-9
第一章甘蓝型油菜矮化突变体“NDF-1”抑制性消减文库的构建和初步筛选  9-35
  1 引言  9-10
  2 材料与方法  10-16
    2.1 材料  10-11
    2.2 实验方法和步骤  11-16
  3 实验结果与分析  16-31
    3.1 总 RNA和 mRNA的提取  16-17
    3.2 削减效率的检测  17-18
    3.3 消减cDNA文库的构建  18-19
    3.4 消减文库阳性克隆的检测  19
    3.5 斑点杂交结果  19-20
    3.6 测序结果的比较与分析  20-30
    3.7 部分基因的功能分析  30-31
  4 讨论  31-32
  5 小结  32-33
  参考文献  33-35
第二章甘蓝型油菜矮化突变体“NDF-1”中 BND5和 BND11基因全长CDNA的克隆  35-61
  1 引言  35-36
  2 材料与方法  36-39
    2.1 材料  36-37
    2.2 实验方法和步骤  37-39
  3 BnD5实验结果与分析  39-50
    3.1 BnD5基因cDNA全长的克隆  39
    3.2 BnD5基因cDNA编码区全序列与甘蓝和拟南芥中同源序列的比较  39-41
    3.3 BnD5基因编码的蛋白质序列与结构分析  41-50
  4 BnD11实验结果与分析  50-57
    4.1 BnD11基因cDNA全长的克隆  50-51
    4.2 BnD11基因cDNA编码区全序列与甘蓝和拟南芥中同源序列的比较  51-52
    4.3 BnD11基因编码的蛋白质序列与结构分析  52-57
  5 讨论  57-58
  6 小结  58-59
  参考文献  59-61
文献综述植物激素对植株矮化的调控  61-77
  1 与GA相关的植物矮化突变体  61-69
    1.1 GA缺陷型矮化突变体  62-64
    1.2 GA不敏感型矮化突变体  64-69
  2 与BR相关的矮化突变体  69-73
    2.1 BR缺陷型矮化突变体  70-71
    2.2 BR信号传导受阻引起的矮化  71-73
  3 与IAA有关的植物矮化突变体  73
  4 小结  73-74
  参考文献  74-77
在读硕士期间发表论文情况  77-78
声明  78-79
致谢  79

甘蓝型油菜矮化突变体“NDF-1”抑制性消减文库的构建和BnD5、BnD11基因全长cDNA的克隆

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