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ESA联合STAg滴鼻免疫小鼠诱导的弓形虫特异性黏膜及系统免疫应答

作　者: 管志玉
导　师: 殷国荣
学　校: 山西医科大学
专　业: 病原生物学
关键词: 弓形虫 ESA STAg 滴鼻免疫剂量联合抗原黏膜免疫
分类号: R392
类　型: 硕士论文
年　份: 2006年
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内容摘要

目的观察弓形虫排泄分泌抗原(excreted/secreted antigens, ESA)与可溶性速殖子抗原(soluble tachyzoite antigen, STAg)联合滴鼻免疫小鼠诱导的黏膜及系统免疫应答的能力,探讨其诱导免疫应答的机制,为弓形虫黏膜疫苗复合抗原的筛选提供初步的理论和实验依据。方法本实验分三部分:第一部分观察弓形虫感染小鼠不同时间从腹水中获取的ESA滴鼻免疫小鼠诱导黏膜和系统免疫应答的效果,确定获取ESA的适宜时间。分别用弓形虫感染第0h、6h、12h、24h、36h、48h和60h无菌收集的腹腔液中获取的ESA以20μg/只或PBS以20μl/只滴鼻免疫10只小鼠2次,间隔14天。观察小鼠状况并记录体重,末次免疫后第14天颈椎脱臼处死小鼠,ELISA法检测血清弓形虫特异性IgG、小肠冲洗液sIgA抗体水平,分离脾淋巴细胞、肠上皮内淋巴细胞(intestinal intraepithelial lymphocytes, iIEL)及肠系膜淋巴结淋巴细胞(mesenteric lymph node lymphocytes,MLNL)并计数。第二部分观察以不同剂量弓形虫感染小鼠48h获取的ESA滴鼻免疫小鼠诱导黏膜及系统免疫应答的效果,确定合适的ESA鼻内接种剂量。分别用5μg、10μg、20μg和30μg ESA/只或PBS 20μl/只滴鼻免疫8只小鼠2次,间隔14天。观察小鼠状况,于末次免疫后第14天颈椎脱臼处死小鼠,ELISA法检测鼻咽冲洗液弓形虫特异性sIgA、小肠冲洗液sIgA、血清IgG抗体水平,分离iIEL和MLNL及脾淋巴细胞并计数。第三部分观察弓形虫排泄分泌抗原与可溶性速殖子抗原联合或单独滴鼻免疫小鼠诱导黏膜及系统免疫应答的效果,筛选弓形虫复合黏膜疫苗候选抗原成分。分别用30μg ESA、20μg STAg、25μg联合抗原(15μg ESA加10μgSTAg)/只或PBS 20μl/只滴鼻免疫10只小鼠2次,间隔14天。观察小鼠健康状况并记录体重,于末次免疫后第14天颈椎脱臼处死小鼠,ELISA法检测小肠冲洗液弓形虫特异性sIgA、血清IgG抗体水平,分离iIEL和脾淋巴细胞并计数。结果不同时相ESA滴鼻免疫小鼠后,除60h组外,其它实验组及PBS组小鼠健康状况良好,体重变化随时间均呈现上升趋势。60h组小鼠状态欠佳,体重增长较其它实验组及PBS组缓慢(P<0.05)。实验组血清和黏膜特异性抗体水平升高,MLNL、iIEL和脾淋巴细胞发生增殖性应答。48h组和60组血清IgG、小肠冲洗液sIgA水平及iIEL、MLNL和脾淋巴细胞数量均明显高于除36h组外的其他实验组及PBS组(P<0.01)。36h组小肠冲洗液sIgA水平及MLNL数量明显高于0h组和PBS组(P<0.05)。不同剂量ESA滴鼻免疫小鼠后,各组小鼠健康状况良好。随鼻内免疫ESA剂量的增加,实验组特异性抗体水平不同程度的升高,MLNL、iIEL及脾淋巴细胞也发生不同程度

全文目录

中文摘要  6-8
英文摘要  8-10
英文缩略语  10-11
正文  11-53
  第一章实验一不同时相弓形虫 ESA 滴鼻免疫小鼠诱导的黏膜及系统免疫应答  11-27
    前言  12-13
    材料与方法  13-17
    结果  17-19
    讨论  19-23
    小结  23-24
    参考文献  24-27
  第二章实验二不同剂量弓形虫 ESA 滴鼻免疫小鼠诱导的黏膜及系统免疫应答  27-40
    前言  28-29
    材料与方法  29-32
    结果  32-34
    讨论  34-36
    小结  36-37
    参考文献  37-40
  第三章实验三 ESA 联合 STAg 滴鼻免疫小鼠诱导的弓形虫特异性黏膜及系统免疫应答  40-53
    前言  41-42
    材料与方法  42-45
    结果  45-47
    讨论  47-49
    小结  49-50
    参考文献  50-53
综述  53-61
  正文  53-58
  参考文献  58-61
个人简介  61-62
致谢  62

ESA联合STAg滴鼻免疫小鼠诱导的弓形虫特异性黏膜及系统免疫应答

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