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原卟啉钠提取工艺的改进及其对丙肝病毒的体外抑制研究

作　者: 梁勇
导　师: 王克霞；刘群红
学　校: 安徽理工大学
专　业: 病原生物学
关键词: 原卟啉钠丙型肝炎病毒抑制 HCV亚基因复制子细胞
分类号: R965
类　型: 硕士论文
年　份: 2006年
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内容摘要

目的本研究对原卟啉钠的制备方法进行了改进,以期简化其生产流程。并且体外观察原卟啉钠的细胞毒性作用及其对HCV亚基因复制子细胞模型RNA的抑制效果。方法将凝固动物血中的蛋白质水解,分离出血红素,经原卟啉、原卟啉甲酯等中间产物,最终精制获得原卟啉钠。根据原卟啉钠的光吸收特性,利用分光光度法对其进行定性和定量检测。体外实验用CCK-8试剂盒筛选Napp无细胞毒性浓度区间。在培养的细胞中依次加入含有药物的完全培养基（药物最高浓度:Napp 10mg/ml,IFN 10⁶ IU/ml,各组药物10倍稀释,共6个浓度级别,PH7.2）10μl。药物作用72小时后用Cell Counting Kit-8试剂盒在OD_450nm测定细胞活力。然后分别取终浓度为1mg/ml、10^-1mg/ml、10^-2mg/ml、10^-3mg/ml、10^-4mg/ml的Napp与含HCV亚基因复制子细胞培养液中共同孵育,同时设空白对照组和IFN-α2b阳性对照组,3天后用荧光定量PCR法检测HCV复制子中RNA的含量。结果提取物为红褐色结晶,可溶于水,不溶于氯仿、乙醚及丙酮,易溶于酸性溶液。溶于酸性溶液后纯度为93.8%。体外实验无细胞毒药物浓度区间为0～1000μg/ml,在10μg/ml～1000μg/ml区间内对HCV复制子RNA有明显抑制作用（P<0.05～0.01）。结论利用改良后的方法可将非抗凝动物血精制成原卟啉钠,其纯度为93.8%。体外实验Napp对靶细胞安全作用范围较宽,且可有效抑制HCV复制子RNA。

原卟啉钠提取工艺的改进及其对丙肝病毒的体外抑制研究

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