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剪秋罗离体培养再生体系建立及多倍体诱导研究

作　者: 王艳菊
导　师: 陈利萍
学　校: 浙江大学
专　业: 蔬菜学
关键词: 离体培养四倍体秋水仙碱液体处理固体处理叶绿体气孔
分类号: S682.19
类　型: 硕士论文
年　份: 2006年
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内容摘要

剪秋罗是石竹科剪秋罗属多年生草本宿根花卉,原产中国。由于特殊的生长习性和环境,该物种的生存已受到威胁。本文通过离体培养技术建立起了剪秋罗的再生体系,并试图以此对其种质资源进行保存。为了进一步开发和利用该物种,我们对其植物学性状、愈伤组织诱导、染色体倍数和多倍体诱导进行了研究。主要结果总结如下: （1）由于剪秋罗的种子在自然界需要5～6个月才能萌发且萌发效率较低,为了提高种子的发芽率,我们用250mg/L GA₃处理不同储藏时间1～6个月的种子,结果发现储藏5个月的种子发芽率最高为19.4%。（2）剪秋罗再生体系的建立主要以带叶芽茎段为外植体,筛选出了最佳快繁和生根培养基。研究结果表明:最佳快繁培养基配方为MS+1.0mg/L BA+[1.0mg/LNAA,快繁系数为2.8。最佳生根培养基为1/2MS+0.5mg/l NAA,生根率达91.7%。另外,我们对剪秋罗叶片诱导愈伤组织也进行了研究。结果发现,愈伤组织诱导效果最佳的培养基为MS+0.5 mg/L BA+1.0mg/L NAA+1.0mg/L 2,4-D。诱导出的愈伤组织经继代2次,转移到分化培养基MS+2.0mg/L BA+1.0mg/L 2,4-D上分化出再生芽,分化频率为4.2%。（3）对剪秋罗的染色体分析发现,该物种染色体数2n=2x=24为二倍体,为我国所特有。为了进一步提高其观赏价值,我们采用不同浓度的秋水仙素结合不同处理方式对其多倍体诱导进行了研究。结果表明,液体处理方式诱导四倍体的效率优于固体处理方式,而且400mg/L秋水仙碱处理,存活率（58.3%）和诱导率（16.68%）都较好。（4）流式细胞仪和根尖染色体倍性鉴定表明,由秋水仙碱诱导获得的剪秋罗多倍体植株为四倍体,其染色体数为2n=4x=48。（5）同时,我们观察了二倍体和四倍体植株的植物学和细胞学性状。结果表明,四倍体植株比二倍体植株矮,叶片短而宽,而且花朵直径比二倍体花朵直径大,花丝扭曲。透射电镜观察的结果表明,二倍体和四倍体的叶肉细胞叶绿体数目分别为

全文目录

缩略词  8-9
中文摘要  9-11
ABSTRACT  11-13
前言  13-14
1 文献综述  14-28
  1.1 石竹科植物组织培养的研究现状  14-20
    1.1.1 石竹科植物的组织培养  14-17
    1.1.2 石竹科植物的原生质体培养和体细胞杂交  17-18
    1.1.3 石竹科植物的单倍体育种  18
    1.1.4 石竹科植物的试管开花  18-19
    1.1.5 石竹科植物的转基因  19-20
  1.2 四倍体诱导的方法  20-24
    1.2.1 自然突变形成多倍体  20
    1.2.2 人工诱导获得多倍体  20-24
  1.3 多倍体的鉴定  24-26
    1.3.1 形态学鉴定法  25
    1.3.2 细胞学鉴定法  25
    1.3.3 染色体计数法  25-26
    1.3.4 流式细胞仪分析法  26
    1.3.5 体细胞杂种的鉴定方法  26
  1.4 展望  26-28
2 目的与意义  28-29
3 材料与方法  29-35
  3.1 材料  29
  3.2 剪秋罗种子发芽  29
  3.3 剪秋罗再生体系的建立  29-31
    3.3.1 外植体状态的筛选  29
    3.3.2 快繁培养基筛选  29
    3.3.3 生根培养基筛选  29-30
    3.3.4 驯化移栽  30
    3.3.5 愈伤组织的诱导及其分化  30-31
  3.4 剪秋罗四倍体的离体诱导  31
    3.4.1 培养基  31
    3.4.2 实验设计及诱导  31
  3.5 剪秋罗四倍体的鉴定  31-34
    3.5.1 流式细胞仪分析法  31-32
    3.5.2 染色体计数法  32-33
    3.5.3 形态学鉴定法  33
    3.5.4 细胞学鉴定法  33-34
  3.6 统计分析  34-35
4 结果与分析  35-46
  4.1 GA_3对剪秋罗种子发芽率的影响  35-36
  4.2 剪秋罗再生体系的建立  36-39
    4.2.1 外植体状态对剪秋罗快繁系数的影响  36
    4.2.2 植物激素浓度对植株再生频率及不定芽的影响  36-38
    4.2.3 生根和驯化移栽  38-39
  4.3 不同植物激素配比对叶片诱导愈伤组织的影响  39-40
  4.4 秋水仙碱浓度和处理方式对四倍体诱导的影响  40-41
  4.5 剪秋罗四倍体的鉴定  41-46
    4.5.1 流式细胞仪分析法  41-42
    4.5.2 染色体计数法  42
    4.5.3 形态学鉴定法  42-43
    4.5.4 细胞学鉴定法  43-46
5 讨论  46-50
  5.1 种子发芽  46
  5.2 剪秋罗有效植株再生体系  46-47
  5.3 四倍体的诱导  47-48
  5.4 四倍体的鉴定  48-49
  5.5 剪秋罗的应用  49-50
6 参考文献  50-57
7 发表论文  57-58
8 图版  58-62
9 图版说明  62-63

剪秋罗离体培养再生体系建立及多倍体诱导研究

内容摘要

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