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变形链球菌耐氟菌株与亲代菌株的基因组比较

作　者: 丁春燕
导　师: 于丹妮
学　校: 天津医科大学
专　业: 口腔临床
关键词: 变形链球菌耐氟菌株 F-ATPase AP-PCR SDS-PAGE
分类号: R780.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2006年
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内容摘要

目的:氟化物防龋已有很长的历史,长期局部高浓度氟化物的使用,可导致耐氟菌株选择性的生长。耐氟菌株的出现,给氟化物防龋提出了新的问题,如何避免耐氟菌株的出现而又能充分发挥氟化物的防龋作用,探讨耐氟菌株的耐氟机理便显得极为重要。本实验运用分子生物学技术对变形链球菌耐氟菌株与亲代株的基因组、蛋白组进行比较,判定变形链球菌耐氟突变后,其遗传型是否发生显著性改变。变形链球菌的致龋能力主要是它具有产酸和耐酸两大特性,而这种耐酸能力主要通过细菌的F-ATPase得以实现。通过测定并比较变形链球菌耐氟菌株及其亲代菌株的F-ATPase的活性,并进一步对其基因组进行比较,探讨耐氟菌株耐酸性提高的原因。为进一步研究其基因改变的具体部位及耐氟机理提供理论依据,为研究变形链球菌耐氟菌株耐酸性的增强机制奠定基础。方法:1 提取变形链球菌耐氟菌株与亲代菌株的整体基因组,运用AP-PCR技术对其DNA进行对比研究;2 提取变形链球菌耐氟菌株与亲代菌株的可溶性蛋白组和不可溶性蛋白组,运用SDS-PAGE技术进行对比研究;3 将变形链球菌耐氟菌株与亲代菌株通过甲苯处理,2个循环的液氮冷冻和解冻,制备透性细胞。将透性细胞悬液加入测试缓冲液中,测定不同时间段样品中水解ATP所释出的无机磷量来评价其膜上的ATPase活性高低;4 自行设计F-ATPase区域的引物,用PCR法对变形链球菌耐氟菌株与亲代菌株F-ATPase的基因组进行比较研究。结果:1 运用AP-PCR技术对变形链球菌耐氟菌株与亲代菌株的全菌DNA进行扩增,得出的条带不完全相同;2运用SDS-PAGE技术对变形链球菌耐氟菌株

全文目录

中文摘要  5-7
英文摘要  7-10
缩略语表  10-11
前言  11-15
实验研究  15-39
  第一部分变形链球菌耐氟菌株与亲代菌株基因组、蛋白组的比较  15-26
    实验一变形链球菌耐氟菌株与亲代菌株AP-PCR基因组的比较  15-22
      材料和方法  15-18
      结果  18-19
      讨论  19-22
    实验二变形链球菌耐氟菌株与亲代菌株蛋白组SDS-PAGE的比较  22-26
      材料和方法  22-23
      结果  23-24
      讨论  24-26
  第二部分变形链球菌耐氟菌株与亲代菌株F-ATPase的比较  26-39
    实验一变形链球菌耐氟菌株与亲代菌株F-ATPase的活性比较  26-31
      材料和方法  27-28
      结果  28-29
      讨论  29-31
    实验二变形链球菌耐氟菌株与亲代菌株F-ATPase的基因组比较  31-39
      材料和方法  31-33
      结果  33-35
      讨论  35-39
全文总结  39-41
参考文献  41-48
致谢  48-49
附录  49-60

变形链球菌耐氟菌株与亲代菌株的基因组比较

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