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乳杆菌代谢产物RNA组分序列分析及对其部分生物学功能的研究

作　者: 刘春亮
导　师: 唐立
学　校: 大连医科大学
专　业: 病原生物学
关键词: 序列 CPG-ODN Toll 样受体(TLRs) NF-κB IL-6
分类号: R378
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


目的:1.分析乳杆菌代谢产物RNA组分的序列,明确该核酸成分的性质2.通过RNA组分在体外对Caco-2细胞TLR-9通路及对细胞增殖影响的研究,探讨其作用机制及对肿瘤细胞的作用3.通过RNA组分对肠道菌群失衡小鼠肠粘膜绒毛形态及派氏结中细胞形态恢复情况的研究,探讨其对肠道机械屏障及免疫细胞的作用方法:1.乳杆菌代谢产物RNA组分序列分析:应用Solexa上机前处理过程对样品RNA进行处理,经过加接头反转录后对连接产物进行PCR扩增,进而对PCR产物做TA克隆测序。(测序委托深圳华大基因科技有限公司进行)2.乳杆菌代谢产物RNA组分对Caco-2细胞TLR9通路及细胞增殖的影响(1)实验分为四组,阴性对照组、阳性对照组、RNA100ug/ml组、RNA200ug/ml组。实验组中加入不同浓度RNA组分,阳性对照组中加入CPG-ODN(2)RT-PCR法检测TLR9、NF-κBp65、IL-6 mRNA水平的变化;免疫组化法检测NF-κBp65蛋白水平的变化;ELISA法检测Caco-2细胞培养液中IL-6的变化(3)MTT法检测RNA组分对Caco-2细胞增殖的影响3.乳杆菌代谢产物RNA组分对肠道菌群失衡小鼠肠粘膜绒毛形态及派氏结中细胞形态的影响(1)SPF级Balb/c小鼠随机分为正常组,重度失衡组,自然恢复组,RNA恢复组。采用抗生素头孢曲松钠灌胃的方式建立小鼠肠道菌群失衡模型后,以RNA组分10mg/kg/天的剂量,连续3天灌胃调节,并从灌服之日起第7天提取标本,检测指标(2)HE染色及透射电镜观察菌群失衡小鼠通过RNA组分恢复后肠粘膜绒毛形态变化(3)透射电镜观察菌群失衡小鼠通过RNA组分恢复后派氏结中细胞形态变化结果:1.乳杆菌代谢产物RNA组分序列分析:所得39条序列,经Blast比对其中包含德氏乳杆菌23S rRNA和鼠李糖乳杆菌tRNA-Leu等2.乳杆菌代谢产物RNA组分对Caco-2细胞TLR9通路及细胞增殖的影响(1)与对照组相比RNA组分组TLR9及NF-κBp65、IL-6在mRNA及蛋白水平的表达量均高于阴性对照组,100ug/mlRNA组表达量低于阳性对照组,200ug/mlRNA组表达量高于阳性对照组(2)RNA组分对Caco-2细胞增殖有抑制作用,显示出明显的时间剂量依赖性3.乳杆菌代谢产物RNA组分对肠道菌群失衡小鼠肠粘膜绒毛形态及派氏结中细胞形态的影响(1)肠粘膜绒毛形态:应用回灌RNA进行恢复后,通过HE染色发现与自然恢复组相比,肠上皮细胞层细胞排列紧密,肠绒毛排列规整,肿胀、断裂消失,绒毛顶端未见坏死脱落的肠上皮细胞,且炎性细胞浸润减少。通过电镜观察发现与自然恢复组相比,微绒毛恢复整齐,细胞间连接更加紧密(2)派氏结中细胞形态:经过回灌RNA进行恢复后,通过电镜观察发现肠壁派氏结重度失衡组与正常组相比较,淋巴细胞之间的间隙明显变大;树突状细胞伪足变短,通过回灌RNA进行恢复后,与自然恢复组相比,淋巴细胞间隙明显缩窄,树突状细胞伪足延伸结论:1.乳杆菌代谢产物RNA组分中包含德氏乳杆菌23S rRNA和鼠李糖乳杆菌tRNA-Leu等2.乳杆菌代谢产物RNA组分对Caco-2细胞TLR通路具有活化作用3.乳杆菌代谢产物RNA组分对人结肠腺癌Caco-2细胞增殖有抑制作用4.乳杆菌代谢产物RNA组分对肠道菌群失衡小鼠肠粘膜绒毛形态及派氏结中细胞形态具有恢复作用

全文目录


摘要  6-8Abstract  8-11前言  11-12材料和方法  12-21  一、实验材料  12-14  二、实验方法  14-21结果  21-30  (一) 乳杆菌代谢产物 RNA 组分的序列分析  21-24  (二) 乳杆菌代谢产物 RNA 组分对 Caco-2 细胞 TLR9 通路的影响  24-27  (三) 乳杆菌代谢产物 RNA 组分对 Caco-2 细胞增殖的影响  27-28  (四) 乳杆菌代谢产物 RNA 组分对肠道菌群失衡小鼠肠粘膜绒毛形态及派氏结中细胞形态的影响  28-30讨论  30-34结论  34-35参考文献  35-38综述  38-46  参考文献  43-46附录  46-47致谢  47

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中图分类: > 医药、卫生 > 基础医学 > 医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学） > 病原细菌
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