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三种肺炎链球菌表面蛋白联合诱导的特异性IgG抗体介导的免疫保护

作　者: 吴凯峰
导　师: 张雪梅
学　校: 重庆医科大学
专　业: 临床检验诊断学
关键词: 肺炎链球菌 Ply突变体 ClpP Lpl 协同效应免疫保护
分类号: R392
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

【背景】在所有可通过疫苗预防的疾病中,肺炎链球菌疾病是导致全球5岁以下儿童死亡的首要病因。据世界卫生组织估计全球每年约有160万人死于各种肺炎链球菌疾病,其中5岁以下儿童占100万,90%以上的死亡病例在发展中国家。肺炎链球菌抗生素耐药形势也日趋严峻。因此,世界卫生组织推荐将肺炎链球菌疫苗纳入各国家/地区的免疫规划项目中。【方法】本研究利用基因重组技术、重组蛋白原核表达技术构建,制备了肺炎链球菌Lpl蛋白以及第146位氨基酸缺失的溶血素(Ply)。通过体外溶血试验鉴定Ply蛋白及其突变体ΔA146 Ply蛋白的溶血活性;通过中和试验和肺组织切片分析明确ΔA146 Ply特异性抗体的中和毒素能力和免疫原性。采用Western技术分析Ply蛋白和Lpl蛋白在不同菌株中的表达情况以获得保守性信息。疫苗候选ClpP、Lpl、ΔA146 Ply蛋白单一或联合免疫小鼠,利用鼻腔攻毒方式评价其减少细菌肺内定植的能力;利用腹腔攻毒实验评价其对肺炎链球菌引起的严重感染败血症的抵抗能力。利用抗体吸附试验将产生的特异性抗体消除,并模拟被动保护实验分析特异抗体在保护中的作用。【结果】本研究成功制备ΔA146 Ply重组蛋白,其溶血活性全部丧失。ΔA146 Ply蛋白诱导产生的多克隆抗体能有效抑制野生Ply的溶血活性。经Western分析,Lpl和Ply在本研究所采用的12株不同血清型肺炎链球菌中均有表达。候选分子单一保护效果试验显示: Lpl、ΔA146 Ply、ClpP蛋白免疫后,均能使肺炎链球菌血清型19F和14的肺内定植减少10倍以上(P<0.05);使用强毒力的肺炎链球D39(血清型2型)腹腔攻毒,ΔA146 Ply和ClpP组小鼠的中位生存期延长。在使用D39菌株鼻腔攻毒时,ClpP和Lpl蛋白几乎没有保护效果;而ΔA146 Ply蛋白单一使用的保护效率为50%,与联合Lpl和(或)ClpP保护效力相当。后续试验中,我们重点评价了三种蛋白联合使用(IC247)的有效率,使用致死剂量的14、19F、23F鼻腔攻毒,IC247有效率均为100%;对于致死剂量的血清型6B鼻腔攻毒,有效率为80%;而对于由4种不同血清型所致的混合感染,IC247的有效率为70%。IC247所提供的保护效果与目前市场上使用的23价多糖疫苗和7价蛋白结合疫苗效果相当。Lpl、ClpP、ΔA146 Ply蛋白特异性IgG抗体缺失的IC247抗血清在被动保护实验中不能提供保护作用。【结论】三种表面蛋白具有一定的协同保护效果,IC247候选疫苗组合能有效抵抗多种血清型肺炎链球菌的感染。IC247候选疫苗所提供的保护与其特异性抗体密切相关。

全文目录

英汉缩略语名词对照  5-7
中文摘要  7-9
英文摘要  9-12
前言  12-15
第一部分肺炎链球菌CLPP 蛋白、PLY 突变体和LPL 蛋白的原核表达  15-30
  1 实验材料  15-17
  2 实验方法  17-22
  3 实验结果  22-27
  4 讨论  27-30
第二部分蛋白多价疫苗（IC247）的保护性实验研究  30-45
  1 实验材料  30-31
  2 实验方法  31-35
  3 实验结果  35-42
  4 讨论  42-45
第三部分 IC247 多克隆抗体被动免疫保护效果评价以及机制探讨  45-50
  1 实验材料（见第一，二部分）  45
  2 实验方法  45-47
  3 实验结果  47-48
  4 讨论  48-50
参考文献  50-53
全文总结  53-54
综述：肺炎链球菌疫苗现状  54-64
致谢  64-65
发表论文及专利申请  65-66

三种肺炎链球菌表面蛋白联合诱导的特异性IgG抗体介导的免疫保护

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