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成纤维激活蛋白α（+）胰腺星状细胞促进胰腺癌细胞迁移和侵袭及机制研究

作　者: 文张
导　师: 廖泉
学　校: 北京协和医学院
专　业: 普通外科学
关键词: 成纤维激活蛋白α 胰腺星状细胞胰腺癌迁移侵袭
分类号: R735.9
类　型: 博士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

研究背景胰腺癌是一种进展迅速、死亡率高的恶性肿瘤,其显著的病理学特点是间质成分较多,纤维增生反应明显。越来越多的研究证据表明,胰腺癌间质在胰腺癌的发生和发展中扮演了重要的角色。目前胰腺癌综合治疗效果不佳,预后差,针对胰腺癌间质的研究和治疗策略,有可能提高胰腺癌的综合治疗效果,改善胰腺癌患者的预后。成纤维激活蛋白α(FAPα)作为丝氨酸蛋白酶家族的成员,在激活的间质中表达,参与不同的生理和病理生理过程,如胚胎发育、伤口愈合、慢性炎症和恶性肿瘤等。肿瘤间质中表达FAPα的肌成纤维样细胞可促进肿瘤细胞增殖和侵袭、影响肿瘤细胞凋亡、并与恶性肿瘤病人的不良预后密切相关。针对肿瘤间质FAPα新的肿瘤诊疗策略,吸引越来越多的研究者关注。胰腺癌间质中肌成纤维样细胞的主要来源为胰腺星状细胞,然而针对表达FAPα的胰腺星状细胞在胰腺癌的进展过程中所发挥作用及其相关机制尚无研究报道。本研究探讨FAPα(+)胰腺星状细胞在胰腺癌的进展过程中所扮演的角色以及与胰腺癌细胞相互作用的机制。目的(1)研究胰腺癌间质中FAPα与胰腺癌临床病理特点和胰腺癌患者的预后关系；(2)研究FAPα(+)胰腺星状细胞对胰腺癌细胞恶性表型的影响；(3)研究FAPα(+)胰腺星状细胞影响胰腺癌恶性表型的机制。方法(1)应用免疫组织化学方法检测胰腺癌组织切片中FAPα的表达情况；分析FAPα与胰腺癌临床病理特点和胰腺癌患者的预后关系；(2)Out-growth方法分离人原代胰腺星状细胞；采用TGFβ1诱导胰腺星状细胞表达FAPα,获得FAPα(+)胰腺星状细胞；CCK8检测在体外FAPα(+)和FAPα(—)胰腺星状细胞对胰腺癌细胞增殖的影响；Transwell法检测在体外FAPα(+)和FAPα(—)胰腺星状细胞对胰腺癌细胞迁移和侵袭的影响；使用免疫缺陷裸鼠的皮下移植瘤模型,在体内检测FAPα(+)和FAPα(—)胰腺星状细胞对胰腺癌细胞增殖的影响；裸鼠脾脏注射的转移瘤模型,在体内检测FAPα(+)和FAPα(-)胰腺星状细胞对胰腺癌细胞迁移、侵袭和转移的影响。(3)细胞因子芯片检测FAPα(+)和FAPα(—)胰腺星状细胞表达的差异细胞因子；酶联免疫吸附测定法,验证FAPα(+)和FAPα(—)胰腺星状细胞表达的差异细胞因子；人磷酸化酪氨酸激酶受体蛋白芯片检测在FAPα(+)和FAPα(-)胰腺星状细胞影响下,胰腺癌细胞表达的差异磷酸化酪氨酸激酶受体；Western blot检测FAPα(+)和FAPα(—)胰腺星状细胞表达的差异细胞因子的受体,检测胰腺癌细胞的差异酪氨酸激酶受体；免疫共沉淀方法,检测差异细胞因子受体和差异酪氨酸激酶受体的相互作用关系；Transwell方法检测差异细胞因子和差异酪氨酸激酶受体配体,对胰腺癌细胞迁移和侵袭的影响；Western blot检测,差异细胞因子和差异酪氨酸激酶受体配体,对胰腺癌细胞Akt信号通路的影响。结果(1)与癌旁胰腺组织相比,胰腺癌组织的间质高表达FAPα；FAPα主要表达于胰腺癌间质的肌成纤维样细胞,在胰腺癌细胞无表达；FAPα高表达与胰腺癌的淋巴结转移有关；FAPα高表达的胰腺癌患者生存期更短。(2)胰腺癌细胞可释放TGFβ1诱导胰腺星状细胞表达FAPα:CCK8法和裸鼠移植瘤模型的实验结果提示,与FAPα(一)胰腺星状细胞相比,FAPa(+)胰腺星状细胞对胰腺癌细胞增殖的影响无显著性差异；Transwell法和裸鼠脾脏转移瘤模型的实验结果提示：与FAPα(一)胰腺星状细胞相比,FAPα(+)胰腺星状细胞促进胰腺癌细胞迁移和侵袭；应用FAPα抑制剂—Talabostat(PT100),可抑制FAPα(+)胰腺星状细胞促进胰腺癌细胞的迁移和侵袭效应。(3)细胞因子芯片检测和酶联免疫吸附检测法实验结果提示,与FAPα(—)胰腺星状细胞相比,FAPα(+)胰腺星状细胞释放更多的趋化因子CXCL1;磷酸化酪氨酸激酶受体蛋白芯片检测结果提示,与FAPa(—)胰腺星状细胞相比,FAPα(+)胰腺星状细胞促进胰腺癌细胞酪氨酸激酶受体EphBl和EphB3磷酸化；免疫共沉淀法结果提示,CXCR2与EphBl.EphB3存在相互作用关系；Transwell方法结果提示,CXCL1与EphrinB1、EphrinB3可协同促进胰腺癌细胞迁移和侵袭；Western blot检测结果提示,CXCL1与EphrinB1、EphrinB3可协同作用提高胰腺癌细胞Akt磷酸化水平,进而促进胰腺癌细胞迁移和侵袭。结论FAPα(+)胰腺星状细胞能促进胰腺癌迁移、侵袭和转移；针对FAPα(+)胰腺星状细胞与胰腺癌细胞相互作用有可能成为胰腺癌综合治疗的新策略。

全文目录

中文摘要  4-6
ABSTRACT  6-9
前言  9-12
第一部分胰腺癌间质中成纤维激活蛋白α与胰腺癌临床病理特点及预后相关性的研究  12-26
  材料与方法  13-17
  结果  17-23
  讨论  23-25
  结论  25-26
第二部分成纤维激活蛋白α(+)胰腺星状细胞对胰腺癌细胞恶性表型的影响  26-64
  材料与方法  27-47
  结果  47-58
  讨论  58-63
  结论  63-64
第三部分成纤维激活蛋白α(+)胰腺星状细胞影响胰腺癌细胞恶性表型的机制探讨  64-91
  材料与方法  65-74
  结果  74-86
  讨论  86-90
  结论  90-91
全文小结  91-92
攻读学位期间取得的研究成果  92-93
综述1  93-99
综述2  99-105
参考文献  105-113
中英文缩略词表  113-116
致谢  116-117

成纤维激活蛋白α（+）胰腺星状细胞促进胰腺癌细胞迁移和侵袭及机制研究

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