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RASSF1A、DAPK、MGMT、p16、RARβ启动子甲基化与肺癌A549细胞对顺铂敏感性的初步研究

作　者: 董子鹤
导　师: 陈辉
学　校: 重庆医科大学
专　业: 临床检验诊断学
关键词: 甲基化 A549细胞化疗耐药顺铂
分类号: R734.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

目的：非小细胞肺癌产生获得性耐药是临床化疗失败的重要原因。有研究表明，多个基因甲基化引起的表达改变可能是肿瘤对化疗药物敏感性的调控因素之一。因而本研究拟初步筛选与肺腺癌A549细胞对顺铂敏感性相关的关键基因的甲基化状态，期望为临床预测肺癌对顺铂敏感性提供实验室指标，为新药设计提供新思路。方法：以肺腺癌A549细胞及对顺铂耐受的同源A549细胞(A549-DDP)为研究对象，通过甲基化特异性PCR(MSP)检测五个候选基因(RASSF1A、MGMT、DAPK、p16、RARβ)的甲基化状态，RT-PCR检测候选基因在mRNA水平的表达。进一步研究去甲基化试剂(5-aza-CdR)对相关甲基化基因的改变和对顺铂敏感性的关系，并运用MTT、流式细胞术等检测去甲基化试剂对A549-DDP细胞增殖与凋亡的影响。结果：在A549细胞中，RASSF1A、MGMT、p16呈低甲基化状态和高表达；顺铂耐受的A549-DDP细胞中，这三个基因均以甲基化状态为主，mRNA表达明显下调；但RARβ仅在A549-DDP细胞中呈非甲基化和高表达，DAPK的甲基化和表达水平在两个细胞亚型间无明显差异。A549-DDP细胞经去甲基化试剂作用后，RASSF1A、MGMT在A549-DDP细胞中的mRNA表达水平上调。A549细胞对顺铂的IC50值为（3.64±0.71）μmol/l，10μmol/l5-aza-CdR作用前后的A549-DDP细胞对顺铂的IC50值分别为：（25.10±3.23）μmol/l，（6.55±1.02）μmol/l。5-aza-CdR可显著提高顺铂对A549-DDP细胞的抑制增殖和促进凋亡的作用。结论：RASSF1A、MGMT、p16、RARβ基因甲基化修饰导致的mRNA表达改变可能是肺腺癌A549细胞对顺铂敏感性的调控因素之一，并与顺铂的抑制增殖和促进凋亡的作用相关，甲基化基因谱的改变有望成为实验室预测顺铂对肺癌敏感性的实验室指标。

全文目录

英汉缩略语名词对照  4-6
摘要  6-8
Abstract  8-10
前言  10-12
第一部分 A549 细胞与 A549-DDP 细胞中 RASSF1A 、MGMT、DAPK、p16、RARβ启动子甲基化和表达的比较研究  12-24
  1 材料  12-13
  2 方法  13-17
  3 结果  17-21
  4 讨论  21-24
第二部分去甲基化试剂对 A549-DDP 细胞对顺铂敏感性以及增殖和凋亡水平的影响  24-32
  1 材料  24-25
  2 方法  25-26
  3 结果  26-29
  4 讨论  29-32
全文总结  32-33
参考文献  33-36
文献综述  36-45
  参考文献  41-45
致谢  45-46
攻读学位期间发表的学术论文目录  46

RASSF1A、DAPK、MGMT、p16、RARβ启动子甲基化与肺癌A549细胞对顺铂敏感性的初步研究

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