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Ⅰ型与Ⅱ型子宫内膜癌差异表达microRNA的筛选及其靶基因的研究

作　者: 周静
导　师: 沈铿
学　校: 中国协和医科大学
专　业: 临床医学
关键词: 内膜癌分型 miRNA 微阵列芯片蛋白质组学靶基因 real-time RT-PCR
分类号: R737.33
类　型: 博士论文
年　份: 2008年
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内容摘要

目的筛选Ⅰ型和Ⅱ型人子宫内膜癌细胞系中差异表达的miRNA并预测和初步验证其靶基因。方法(1)通过体内成瘤病理学检查、免疫组化检测ER、PR、p53和Ki-67的表达、对雌孕激素作用的反应来鉴定两个细胞系Ishikawa和KLE的分型;(2)无雌孕激素环境下培养细胞系Ishikawa和KLE,提取总RNA进行miRNA芯片检测和基因表达谱芯片检测;提取总蛋白进行蛋白质组学分析;(3)用miRANDA和TargetScan软件结合芯片和蛋白质分析结果,预测差异表达的miRNA可能的靶基因;(4)选择可能分别以ESR1和PGR为靶基因的miRNA100、99a和miRNA378、768-3p,用Real-Time RT-PCR技术验证在体内和体外培养的两个细胞系以及10例人内膜癌标本中其表达的差异性。结果经鉴定确认Ishikawa来源于Ⅰ型内膜癌,KLE来源于Ⅱ型内膜癌;miRNA芯片筛选出两个细胞系中差异表达的miRNA共126个;基因表达谱芯片筛选出两个细胞系中差异表达的基因共3355个;蛋白质组学分析在两个细胞系中共鉴定出差异表达的蛋白14个;鉴定出的蛋白和免疫组化检测的共18个蛋白中有13个预测到可能以其为靶基因的目标miRNA;Real-Time RT-PCR验证出hsa-miR-100在Ⅰ型组病理标本中的表达显著低于Ⅱ型组,miRNA100、99a、378、768-3p在体外和体内培养的细胞系Ishikawa和KLE中的差异表达基本一致。结论本实验在两种内膜癌细胞系中首次鉴定出的14个蛋白具有成为内膜癌分型标志的潜力;13个蛋白分别预测出目标miRNA;hsa-miR-100的靶基因很可能为ESR1;本实验所采用的筛选与预测方法能较大的缩窄miRNA靶基因的预测范围。

全文目录

中文摘要  4-5
ABSTRACT  5-7
前言  7-8
第一部分细胞培养与分型确认  8-16
  材料与方法  8-11
  实验结果  11-15
  实验意义  15-16
第二部分两个细胞系中差异表达MICRORNA的筛选  16-23
  材料与方法  16-18
  实验结果  18-23
第三部分两个细胞系中差异表达基因的筛选  23-30
  材料与方法  23-27
  实验结果  27-30
第四部分两个细胞系中差异蛋白质的筛选  30-41
  材料与方法  30-37
  实验结果  37-41
第五部分数据分析与验证  41-52
  材料与方法  41-47
  实验结果  47-52
讨论  52-60
结论  60-61
综述  61-69
  参考文献  65-69
致谢  69

Ⅰ型与Ⅱ型子宫内膜癌差异表达microRNA的筛选及其靶基因的研究

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