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一氧化氮光学生物传感器的研制及其用于药物体外释放研究和对刺激巨噬细胞产生一氧化氮药物的考察

作　者: 代晶
导　师: 吕太平
学　校: 四川大学
专　业: 药物分析
关键词: 一氧化氮细胞色素C 光学生物传感器 NO供体体外释放巨嗜细胞药物活性
分类号: R91
类　型: 硕士论文
年　份: 2005年
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内容摘要

一氧化氮（NO）是生物体内的一种信使分子和效应分子,在生理和病生过程中起重要作用,自90年代以来一直是各国科学家研究的热点。因NO为小分子化合物,在有氧的条件下极不稳定(t_1/2<6s),测定难度大,故相关分析方法的研究受到极大的关注。目前常用的测定NO含量的化学方法多属间接测定法,即测定其代谢终产物NO₂^-或（和）NO₃^-,如Griess比色法。本实验根据NO可以与含铁卟啉的生物分子发生反应,改变其吸收光谱,在特性波长下吸收度的改变与体系中NO浓度相关的特性,研究了以细胞色素C（cytochrome C, CytC）为敏感材料的吸光型NO生物传感器。本文以酸性条件下的NaNO₂为NO源,建立了吸光型NO生物传感器对NO的测定方法,并用该生物传感器研究了NO供体药物的体外释放通路,并考察了一些药物对体外小鼠腹腔巨噬细胞合成NO的影响。本课题包括以下几个部分: （一）吸光型NO生物传感器探头的研制本部分实验就传感器敏感材料——CytC的固定方法进行了筛选和比较。分别以金溶胶自组装法,壳聚糖共价结合法、溶胶凝胶技术的包埋法对CytC进行固定。通过对固定膜的表观性状及其对NO响应性能的考察,全面评价了这几种固定方法的特点。结果表明以Al₂O₃/SiO₂复合膜的性能最好,响应时间为

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中文摘要  5-8
英文摘要  8-11
前言  11-15
  1． NO的重要生物学作用  11
  2．目前用于 NO分析的主要方法  11-13
    2．1 NO电化学传感器(NO电极)  12
    2．2 NO光学传感器  12-13
  3．课题构建的 NO光学传感器原理  13
  4．传感器结构的设计  13
  5．课题总体设计及意义  13-15
第一部分吸光型 NO生物传感器探头的研制  15-39
  一．仪器与试药  15-16
  二．实验、结果与讨论  16-37
    1． Cyt C金胶自组装膜  16-20
      1．1 溶液的配制  17-18
      1．2 玻璃片的处理  18
      1．3 Cyt C金胶膜的制备  18
      1．4 Cyt C金胶膜性能考察  18-19
        1．4．1 金胶粒子透射电镜(TEM)图  18-19
        1．4．2 固定了Cty C的金胶膜的表征  19
      1．5 讨论  19-20
    2． CytC壳聚糖膜  20
      2．1 壳聚糖膜的制备  20
      2．2 壳聚糖膜的性质  20
    3． CytC溶胶-凝胶膜  20-34
      3．1 基于硅氧烷化合物和异丙醇铝的溶胶凝胶膜  21-31
        3．1．1 Cyt C的固定  21-22
        3．1．2 Cyt C的溶胶凝胶膜的性质考察  22-23
        3．1．3 Cyt C的溶胶凝胶膜对 N0的测定  23-27
        3．1．4 膜 E对 NO的测定  27-29
        3．1．5 讨论  29-31
      3．2 基于Al_2O_3/SiO_2的复合溶胶凝胶膜  31-34
        3．2．1 Al_2O_3/SiO_2复合膜的制备  31
        3．2．2 Al_2O_3/SiO_2复合膜性质  31-33
        3．2．3 Cyt C的 Al_2O_3/SiO_2复合膜对 NO响应性能  33-34
    4． Cyt C-Al_2O_3/SiO_2复合膜生物传感器对 NO测定方法  34-37
      4．1 线性关系、线性范围  34-35
      4．2 (?)检测限  35
      4．3 精密度试验  35-36
      4．4 回收试验  36-37
      4．5 膜的干扰性试验  37
      4．6 讨论  37
  小结  37-39
第二部分用 NO生物传感器研究一氧化氮供体药物体外释放的方法  39-55
  一、仪器和试剂  40-41
    1．仪器  40-41
    2．试剂  41
  二、实验与结果  41-52
    1．溶液的配制  41-42
    2． NO供体药物体外释放 NO测定方法的建立  42-50
      2．1 CytC膜在酸化的生理溶液中与 NO的反应  42-43
      2．2 在生理溶液中的线性关系及线性范围  43
      2．3 (?)检测限  43-44
      2．4 精密度试验  44
      2．5 干扰试验  44-48
        2．5．1 L-cys干扰试验  44-45
        2．5．2 L-GSH干扰试验  45
        2．5．3 SNP干扰试验  45-48
      2．6 样品测定方法  48-49
      2．7 加样回收试验  49-50
    3．硝普钠在生理液中释放的通路及机理研究  50-52
      3．1 NO传感器法研究 NO供体的体外释放  50-51
      3．2． Griess比色法测定 NO供体的体外释放  51-52
        3．2．1 线性范围  51-52
        3．2．2 样品测定  52
  讨论  52-54
  小结  54-55
第三部分用 NO生物传感器考察刺激小鼠腹腔巨噬细胞产生 NO的药物的方法  55-65
  一、仪器与试药  56-57
    1．仪器  56
    2．试剂  56-57
  二、实验与结果  57-63
    1．小鼠腹腔巨噬细胞的培养  57-58
    2．巨噬细胞产生 NO的传感器测定法的建立  58-62
      2．1 CytC膜在酸化的细胞培养液中与 NO的反应  58
      2．2 线性关系及线性范围  58-59
      2．3 (?)检测限  59
      2．4 精密度试验  59-60
      2．5 干扰试验  60-62
        2．5．1 细胞培养液的影响  60
        2．5．2 IFN、LPS、SPS、LTN、MNT的影响  60-62
    3．样品的测定以及与 Griess法的对照  62-63
      3．1 传感器法对样品的测定  62-63
      3．2 Griess比色法对样品的测定  63
  讨论  63-64
  小结  64-65
总结  65-69
  一、吸光型 NO生物传感器探头的研制  65-66
  二、用 NO生物传感器研究 NO供体药物体外释放的方法  66-67
  二、用 NO生物传感器考察刺激小鼠腹腔巨噬细胞产生 NO的药物的方法  67-69
参考文献  69-79
一氧化氮的分析方法及其在生命科学中的应用(综述)  79-108
致谢  108-109
声明  109

一氧化氮光学生物传感器的研制及其用于药物体外释放研究和对刺激巨噬细胞产生一氧化氮药物的考察

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