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特定理化因子对骨骼肌肌质网囊泡氧化还原系统的影响研究

作　者: 周贞洁
导　师: 夏若虹
学　校: 华东师范大学
专　业: 生物物理学
关键词: Na~+、K~+盐离子 50Hz 0.4mT磁场 NADH氧化酶 超氧自由基 钙释放通道 去垢剂
分类号: Q26
类　型: 硕士论文
年　份: 2006年
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内容摘要


在人类健康问题被异常关注的今天，氧化还原环境对生命进程和质量的影响正成为相关领域研究的热点。研究发现，各类理化因子对生物体内的自由基水平产生了深远的影响，然而其内在的微观影响机制，例如胞内氧化还原机制与钙调控机制之间的关系仍有待深入的探讨。加之，由于细胞水平的研究存在重复性差、模型复杂的特点，分子、细胞器水平的相关研究工作就显得尤为必须和重要。 本文以提取的兔骨骼肌肌质网（SR）囊泡为研究对象，探讨两种特定的理化因子（50Hz 04mT磁场和Na+、K+生理盐离子）对SR囊泡自由基产生机制的调控作用及其对SR上钙释放通道（ryanodine receptor，RyR1）的影响，并初步考察氧化还原系统在SR囊泡上的具体活性位点。 实验采用荧光分光光度计、紫外—可见分光光度计检测两种理化因子对SR上NADH氧化酶（NOX）活性以及伴生超氧自由基（O2-）产率的影响；采用[3H]-ryanodine结合实验、钙释放动力学实验检测两种理化因子对SR上RyR1功能状态的影响；利用去垢剂的作用确定NOX在SR上的位置。 结果显示，高浓度的Na+、K+对SR上NOX活性（由NADH的氧化初速率表征）以及伴生的O2-产率均有抑制作用；在[3H]-ryanodine结合实验中，高浓度的Na+、K+也抑制了由NADH诱导的ryanodine与RyR1结合的升高趋势；在钙释放动力学实验中，不同浓度的K+调控了由NADH诱导的Ca2+释放初速率变化：NOX活性以及O2-产率与RyR开放程度存在正相关关系。同样，50Hz 0.4mT磁场辐照30min，有效地促进了NADH的氧化以及O2-的产生，由NADH诱导的受配体的结合能力以及RyR1的Ca2+释放速率也在磁场作用下得以相应提高。而去垢剂作用使外源的NADH迅速进入SR囊泡膜内，不与膜外的NOX产生氧化还原反应。 由此猜测，骨骼肌肌质网囊泡上存在具有对特定理化因子敏感并中介超氧自由基产生的NADH氧化还原系统，其参与调节肌质网钙释放通道的活性，并且这一氧化还原系统的关键酶——NOX可能在SR囊泡膜上靠外侧的一面。

全文目录


第一章 前言  9-18
  第一节 研究背景  9-11
  第二节 肌质网简介  11-15
  第三节 研究内容与意义  15-18
第二章 材料与方法  18-29
  第一节 试剂  18
  第二节 实验仪器  18-21
  第三节 辐照系统  21-22
  第四节 实验方法  22-29
    1 细胞培养  22
    2 SR囊泡提取  22-23
    3 蛋白浓度测定  23
    4 细胞增殖检测  23-24
    5 超氧产率测量  24-25
    6 NADH氧化率测量  25-27
    7 Ca~(2+)释放初速率测定  27
    8 [~3H]-ryanedine结合实验  27-28
    9 SDS-PAGE凝胶电泳实验  28
    10 数据统计学处理  28-29
第三章 结果与讨论  29-49
  第一节 化学因子对SR氧化还原系统的影响  29-37
    1 盐离子浓度对SR中超氧及NOX活性影响  29-32
    2 盐离子浓度对SR中[~3H]-ryanodine结合影响  32-34
    3 盐离子浓度对SR中Ca~(2+)释放初速率影响  34-37
  第二节 物理因子对SR氧化还原系统的影响  37-41
    1 50Hz低频磁场对SR中超氧及NOX活性影响  37-38
    2 50Hz低频磁场对SR中[~3H]-ryanodine结合影响  38-39
    3 50Hz低频磁场对SR中Ca~(2+)释放初速率影响  39-40
    4 50Hz低频磁场对细胞氧环境及其增殖的影响  40-41
  第三节 去垢剂作用初步确定NOX活性位置  41-49
    1 去垢剂对SR中超氧及NOX活性影响  42-45
    2 去垢剂对SR上蛋白含量影响  45-46
    3 NOX活性位置的分析确定  46-49
第四章 总结与展望  49-51
  第一节 总结  49-50
  第二节 展望  50-51
参考文献  51-56
附录Ⅰ 低频磁场诱导EGFR聚集的时间依赖性研究  56-67
附录Ⅱ 硕士期间发表的相关文章  67-68
后记  68

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中图分类: > 生物科学 > 细胞生物学 > 细胞生物化学
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