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胶孢炭疽菌的遗传多样性
作 者: 陈希芹
导 师: 龚国淑
学 校: 四川农业大学
专 业: 植物病理学
关键词: 胶孢炭疽菌 RAPD分析 rDNA ITS序列分析 致病性 营养体亲和性 遗传多样性
分类号: S432.4
类 型: 硕士论文
年 份: 2004年
下 载: 434次
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内容摘要
炭疽病是世界性的植物病害,对许多作物构成严重威胁,尤其在热带、亚热带地区。有多种炭疽菌可引起作物炭疽病,其中胶孢炭疽菌是一类重要的植物病原真菌,寄主范围十分广泛,给农业生产造成严重的经济损失。本研究从四川、广西、海南等7个省的21种寄主植物(包括果树、蔬菜、花卉、林木)炭疽病中分离获得36个炭疽菌菌株。根据形态特征,35个菌株被鉴定为胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)。仅1个菌株为尖孢炭疽(C.acutatum)。借助胶孢炭疽菌的种特异性引物CgInt、RAPD分析、rDNA ITS/5.8S序列分析等手段充分表明,除山药炭疽菌株(CG1)外,形态鉴定的胶孢炭疽菌(包括来自玉米、菜豆、香蕉)都符合胶孢炭疽菌的特征。 胶孢炭疽菌菌株间从形态特征、致病性、分子遗传水平、营养体亲和群等方面都具有较大的变异。35个胶孢炭疽菌菌株在菌落颜色、分生孢子盘的排列颜色、分生孢子的形状和大小、附着胞的形态及菌落日平均生长量等方面具有明显的差异。通过RAPD和ITS/5.8S区域序列分析表明,胶孢炭疽菌群体内菌株间存在丰富的遗传多样性。根据RAPD数据,在0.72的相似系数水平上,28个菌株可以分成6个组,其中64%菌株被聚入优势组内,组内含有不同致病类型、不同寄主、不同地理来源的菌株,表明RAPD多态性与致病性、寄主种类、菌株地理来源间无明显的直接关系。通过rDNA的ITS/5.8S序列分析表明,胶孢炭疽菌种内菌株在此区域也有一定遗传变异。所有供试菌株(CG1除外)在苹果、葡萄、辣椒和四季豆的收获器官上经人工接种均可造成发病,引起典型的症状特征,其致病力存在着明显的分化,分为强、中、弱三类。同样,致病力分化与寄主种类及地理来源之间无明显的相关性。采用硝酸盐nit突变体互补配对技术对28个胶孢炭疽菌进行营养体亲和性研究表明,菌株间具有丰富的VCG多样性,28个菌株被划分成11个营养体亲和群,17个菌株(占61%)被划入优势组内。营养体亲和群的划分与寄主种类、地理来源、致病性和RAPD分析间未见明显的相关性。
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全文目录
摘要 5-6 1 前言 6-14 1.1 研究的目的及意义 6-7 1.2 文献综述 7-14 1.2.1 几种分子标记方法 7-8 1.2.2 炭疽菌的分类与鉴定 8-11 1.2.3 植物病原真菌群体遗传多样性研究 11-14 1.3 主要研究内容、目标及技术路线 14 2 材料与方法 14-20 2.1 菌株来源 14-16 2.2 炭疽菌的形态鉴定 16 2.3 菌株总DNA的制备 16-17 2.3.1 菌丝的培养 16 2.3.2 DNA提取与检测 16-17 2.4 PCR扩增 17 2.4.1 胶孢炭疽菌种特异性引物(CgInt)检测 17 2.4.2 RAPD分析 17 2.5 炭疽菌rDNA ITS区域的序列分析 17-18 2.5.1 扩增引物 17-18 2.5.2 PCR扩增 18 2.5.3 PCR产物纯化与测序 18 2.5.4 ITS序列数据分析和系统树构建 18 2.6 胶胞炭疽菌的营养亲利性测定测定 18-19 2.6.1 供试菌株 18 2.6.2 培养基 18 2.6.3 方法:硝酸盐利用营养缺陷型(nit)突变体互补测试法 18-19 2.7 炭疽菌的致病性测定 19-20 3 结果与分析 20-34 3.1 胶孢炭疽菌的形态特征 20-24 3.2 胶孢炭疽菌的特异性扩增 24 3.3 RAPD分析 24-27 3.3.1 最佳引物筛选 24-25 3.3.2 扩增结果 25-26 3.3.3 聚类分析 26-27 3.4 rDNA ITS序列分析 27-29 3.4.1 扩增结果 27 3.4.2 系统发育树的构建 27-29 3.5 胶孢炭疽的营养体亲和 29-32 3.5.1 nit突变体的获得 29-30 3.5.2 营养亲和性的测定 30-32 3.6 致病性 32-34 4 结论与讨论 34-37 4.1 供试菌种的培养性状及鉴定 34 4.2 胶孢炭疽菌的特异性扩增 34 4.3 RAPD分析 34-35 4.4 rDNA ITS序列分析 35 4.5 营养体亲和性 35-36 4.6 致病性 36-37 参考文献 37-42 英文摘要 42-43 致谢 43
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中图分类: > 农业科学 > 植物保护 > 病虫害及其防治 > 植物病害及其防治 > 侵(传)染性病害
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