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结核分枝杆菌Rv1272和Rv1273蛋白的功能研究

作　者: 程旭红
导　师: 赵英伟
学　校: 苏州大学
专　业: 病原生物学
关键词: 结核分枝杆菌 Rv1272 Rv1273 MIC EB吸收 生长抑制 ATP水解
分类号: R378.911
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


目的探索结核分枝杆菌Rv1272和Rv1273基因编码蛋白与药物外排的关系及研究其物质转运功能,为探讨结核分枝杆菌耐药分子机制提供实验支持。方法利用生物信息学方法分析Rv1272和Rv1273基因及其编码蛋白的结构,采用PCR技术扩增这两个基因,并与pMF406质粒连接构建重组质粒,测序正确后,电穿孔法将重组质粒转入耻垢分枝杆菌mc2155。同时用pMF406空质粒电转入mc2155做对照。对这两个蛋白进行亚细胞定位后,用试管法测定其对常用的九种抗菌药物的最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration, MIC)。另一方面,用530nm激发光和590nm散射光,显示菌体对溴化乙锭(Ethidium bromide, EB)吸收的量,判断这两个基因是内排还是外排EB。然后构建菌株pMF-△Rv1273,进一步验证这两个基因的功能。最后通过检测菌株生长对EB的敏感性,进一步验证其功能。结果经验证Rv1272和Rv1273为膜蛋白。通过测定发现与对照菌株相比,含有这两个基因的重组菌株对所测药物的MIC无显著性差异,未发现膜蛋白Rv1272和Rv1273在重组菌株中对所测药物的外排作用。与对照菌株相比,菌株pMF406-Rv1272对EB的吸收没有显著变化。而菌株pMF406-Rv1273 EB的吸收量远远高于对照菌株,菌株pMF-△Rv1273与对照菌株EB吸收量基本接近。在大肠杆菌和耻垢分枝杆菌中,含有Rv1272和Rv1273重组质粒的菌株与对照菌株相比,菌体生长均受到抑制。结论Rv1272和Rv1273蛋白为膜蛋白,未发现其与结核分枝杆菌耐药之间的直接关系。Rv1272蛋白可能没有物质转运功能,而Rv1273蛋白可能是一个向内的物质转运泵,而且其转运依赖ATP的水解供能。

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中图分类: > 医药、卫生 > 基础医学 > 医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学） > 病原细菌 > 分枝杆菌属（抗酸性杆菌） > 结核分枝杆菌
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