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圆头精子症相关基因PICK1的初步功能研究

作　者: 史秋雯
导　师: 卢光琇
学　校: 中南大学
专　业: 医学遗传学
关键词: 圆头精子症 PICK1 基因筛查发病机制
分类号: R698
类　型: 硕士论文
年　份: 2008年
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内容摘要

顶体是成熟精子头部的帽状结构,是一种起源于高尔基体的溶酶体样细胞器,在受精过程中的精卵结合步骤发挥了重要作用。顶体生成障碍导致顶体缺失或畸形是圆头精子症的典型特征。数个基因敲除小鼠模型都表现与人圆头精子症患者相似的表型,但尚未在圆头精子症患者中筛查出这些基因的突变。最近有研究者在蛋白激酶C相互作用蛋白1(PICK1)基因敲除小鼠模型中也发现与人圆头精子症相似的表型,这也是国际上首次提出PICK1为圆头精子症候选基因。目的:对四个Ⅰ型圆头精子症病人进行基因筛查,研究圆头精子症病人是否存在PICK1基因突变。并阐明mPICK1在不同发育时期小鼠睾丸中的表达和分布情况。方法:提取圆头精子症患者外周血gDNA,应用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增出圆头精子症患者PICK1基因的外显子,对扩增片段进行测序检测突变,并用限制性酶切分析验证该突变。采用RT-PCR检测成年小鼠mPICK1组织表达谱,原位杂交实验研究mPICK1在成年小鼠睾丸生精细胞内的分布,Real-Time PCR检测不同发育时期小鼠睾丸组织mPICK1的表达量变化。结果:在患者二筛查出PICK1 cDNA G1567A(G-＞R)纯合突变。PvuⅡ限制性酶切检测显示,患者二出现突变导致的酶切位点消失,100个供精者结果正常,无G1567A纯合突变检出。RT-PCR结果显示mPICK1在成年小鼠各组织均有表达,在脑和睾丸的表达量最高;原位杂交结果显示mPICK1在成年小鼠睾丸的精母细胞和精子细胞中表达;Real-Time PCR显示mPICK1在不同发育时期小鼠睾丸中均有表达。结论:在患者二发现的PICK1纯合突变G1567A(G-＞R)为国际上首次报道在病人中筛查出圆头精子症相关基因的突变。PICK1基因参与生精过程。

全文目录

中文摘要  4-6
英文摘要  6-10
中英文缩写对照表  10-11
前言  11-16
  1 圆头精子症的国内外研究现状  11-13
  2 PICK1的国内外研究现状  13-14
  3 本工作的学术意义和临床价值  14-16
实验技术路线  16-17
第一章 PICK1基因突变筛查  17-34
  1.对象、材料和方法  17-24
    1.1 研究对象  17-18
    1.2 材料  18-19
    1.3 方法  19-24
  2.结果  24-31
    2.1 PICK1外显子的PCR扩增结果  24
    2.2 PCR产物测序结果  24-28
    2.3 野生型和突变型PICK1基因酶切位点比较分析  28
    2.4 正常人突变筛查  28-29
    2.5 PICK1野生型和突变型蛋白的生物信息学分析  29
    2.6 患者二家系分析  29-31
  3.讨论  31-33
  4.结论  33-34
第二章 mPICK1在小鼠各组织及各时期小鼠睾丸组织中的表达  34-52
  1.材料和方法  34-41
    1.1 实验动物  34
    1.2 主要仪器设备  34
    1.3 酶及主要试剂  34-35
    1.4 mPICK1基因cDNA PCR扩增引物和内参基因引物  35-36
    1.5 原位杂交试剂配制  36
    1.6 实验方法  36-41
  2.结果  41-48
    2.1 多组织RT-PCR检测成年小鼠mPICK1组织表达谱  41-42
    2.2 成年小鼠睾丸组织切片原位杂交  42-45
    2.3 不同发育时期小鼠睾丸组织cDNA进行Real-Time PCR  45-46
    2.4 统计学结果分析  46-48
  3.讨论  48-50
  4.结论  50-52
参考文献  52-56
综述  56-67
  参考文献  62-67
致谢  67-68
攻读硕士学位期间主要研究成果  68

圆头精子症相关基因PICK1的初步功能研究

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